U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 er en genomredigeret human osteosarkomcellelinje afledt af U2OS-celler, hvor det endogene SEH1L (SEH1)-gen er blevet modificeret ved hjælp af CRISPR/Cas9-teknologi til at kode for et in-frame SNAPf-tag. SEH1 er en komponent i Y-komplekset (også kendt som NUP107-160-komplekset), et centralt strukturelt modul i det nukleare porekompleks (NPC), der bidrager til porestrukturens samling og stabilitet. Ved at indsætte SNAPf-kodningssekvensen på det endogene locus udtrykkes det mærkede SEH1-protein under naturlig regulatorisk kontrol, hvilket bevarer fysiologiske ekspressionsniveauer og minimerer forstyrrelser i det nukleare porekompleks' sammensætning.

SNAPf-tagget er en konstrueret, hurtigt reagerende variant af SNAP-tagget, der kovalent binder benzylguanin-konjugerede substrater, hvilket muliggør selektiv og stabil fluorescerende mærkning i levende eller fiksede celler. I U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler lokaliseres fusionsproteinet til kernehinden i et punktformet mønster, der er karakteristisk for NPC-fordelingen. Da mærkningen finder sted på endogene proteinniveauer, er dette system velegnet til kvantitativ fluorescensmikroskopi, superopløsningsbilleddannelse og enkeltpartikelsporingsanalyser med det formål at dissekere NPC-organisering og stoichiometri. Den flade morfologi og de store kerner i U2OS-celler letter yderligere højopløsningsvisualisering af kernehindestrukturer.

SEH1 deltager i NPC-biogenese og har også været impliceret i kinetokor-associerede processer under mitose. Derfor udgør denne cellelinje en robust platform for undersøgelse af cellecyklusafhængig NPC-samling og -adskillelse, rumlig organisering af Y-komplekset inden for porestrukturen og SEH1's potentielle dobbeltrolle ved kernehinden og mitotiske kinetokorer. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 muliggør mekanistiske studier af nukleare porers arkitektur og dynamik under fysiologisk relevante ekspressionsbetingelser.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring