U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 je genomově upravená lidská osteosarkomová buněčná linie odvozená z buněk U2OS, ve které byl endogenní gen SEH1L (SEH1) modifikován pomocí technologie CRISPR/Cas9 tak, aby kódoval in-frame SNAPf tag. SEH1 je součástí Y-komplexu (známého také jako komplex NUP107-160), základního strukturálního modulu jaderného pórového komplexu (NPC), který přispívá k sestavení a stabilitě pórové kostry. Vložením kódující sekvence SNAPf do endogenního lokusu se značený protein SEH1 exprimuje pod nativní regulační kontrolou, čímž se zachovávají fyziologické úrovně exprese a minimalizují se poruchy složení jaderných pórů.

Značka SNAPf je uměle vytvořená, rychle reagující varianta značky SNAP, která se kovalentně váže na substráty konjugované s benzylguaninem, což umožňuje selektivní a stabilní fluorescenční značení v živých nebo fixovaných buňkách. V buňkách U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 se fúzní protein lokalizuje do jaderné obálky v tečkovitém vzoru charakteristickém pro distribuci NPC. Protože značení probíhá na úrovni endogenních proteinů, je tento systém vhodný pro kvantitativní fluorescenční mikroskopii, superrozlišovací zobrazování a analýzy sledování jednotlivých částic zaměřené na rozbor organizace a stechiometrie NPC. Plochá morfologie a velká jádra buněk U2OS dále usnadňují vysokorozlišovací vizualizaci struktur jaderné obálky.

SEH1 se podílí na biogenezi NPC a je také zapojen do procesů spojených s kinetochory během mitózy. Tato buněčná linie proto poskytuje robustní platformu pro zkoumání sestavování a rozebírání NPC v závislosti na buněčném cyklu, prostorové organizace Y-komplexu v rámci pórovitého lešení a potenciální dvojí role SEH1 v jaderné obálce a mitotických kinetochorech. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 umožňuje mechanistické studie architektury a dynamiky jaderných pórů za fyziologicky relevantních expresních podmínek.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení