U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

Το U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 είναι μια γενετικά τροποποιημένη ανθρώπινη κυτταρική σειρά οστεοσαρκώματος που προέρχεται από κύτταρα U2OS, στα οποία το ενδογενές γονίδιο SEH1L (SEH1) έχει τροποποιηθεί χρησιμοποιώντας την τεχνολογία CRISPR/Cas9 για να κωδικοποιήσει μια ετικέτα SNAPf εντός πλαισίου. Το SEH1 είναι ένα συστατικό του συμπλέγματος Y (γνωστού και ως σύμπλεγμα NUP107-160), ενός βασικού δομικού στοιχείου του συμπλέγματος πυρηνικών πόρων (NPC) που συμβάλλει στη συναρμολόγηση και τη σταθερότητα του σκελετού των πόρων. Με την εισαγωγή της αλληλουχίας κωδικοποίησης SNAPf στον ενδογενή τόπο, η σημασμένη πρωτεΐνη SEH1 εκφράζεται υπό φυσιολογικό ρυθμιστικό έλεγχο, διατηρώντας τα φυσιολογικά επίπεδα έκφρασης και ελαχιστοποιώντας τις διαταραχές στη σύνθεση των πυρηνικών πόρων.

Η ετικέτα SNAPf είναι μια τροποποιημένη, ταχείας αντίδρασης παραλλαγή της ετικέτας SNAP που συνδέεται ομοιοπολικά με υποστρώματα συζευγμένα με βενζυλογουανίνη, επιτρέποντας επιλεκτική και σταθερή φθορίζουσα σήμανση σε ζωντανά ή σταθερά κύτταρα. Στα κύτταρα U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, η πρωτεΐνη σύντηξης εντοπίζεται στο πυρηνικό περίβλημα με ένα χαρακτηριστικό διάσπαρτο μοτίβο NPC. Επειδή η σήμανση πραγματοποιείται σε ενδογενή επίπεδα πρωτεΐνης, αυτό το σύστημα είναι κατάλληλο για ποσοτική φθορίζουσα μικροσκοπία, απεικόνιση υπερ-ανάλυσης και αναλύσεις παρακολούθησης μεμονωμένων σωματιδίων με στόχο την ανάλυση της οργάνωσης και της στοιχειομετρίας των NPC. Η επίπεδη μορφολογία και οι μεγάλοι πυρήνες των κυττάρων U2OS διευκολύνουν περαιτέρω την απεικόνιση υψηλής ανάλυσης των δομών του πυρηνικού περιβλήματος.

Το SEH1 συμμετέχει στη βιογένεση των NPC και έχει επίσης εμπλακεί σε διαδικασίες που σχετίζονται με τον κινητόχορο κατά τη διάρκεια της μίτωσης. Κατά συνέπεια, αυτή η κυτταρική σειρά παρέχει μια ισχυρή πλατφόρμα για τη διερεύνηση της εξαρτώμενης από τον κυτταρικό κύκλο συναρμολόγησης και αποσυναρμολόγησης των NPC, της χωρικής οργάνωσης του συμπλέγματος Y εντός του πλέγματος των πόρων και των πιθανών διπλών ρόλων του SEH1 στο πυρηνικό περίβλημα και στους μιτωτικούς κινητόχορους. Το U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 επιτρέπει τη διεξαγωγή μηχανιστικών μελετών της αρχιτεκτονικής και της δυναμικής των πυρηνικών πόρων υπό φυσιολογικά σχετικές συνθήκες έκφρασης.

37°C, 5%_CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

Στην Cytion, υποστηρίζουμε την ποιότητα και τη βιωσιμότητα των προϊόντων μας. Εγγυόμαστε ότι τα κύτταρά μας θα είναι βιώσιμα κατά την έναρξη της καλλιέργειας για 60 ημέρες μετά την αποστολή από τις εγκαταστάσεις μας. Διαβεβαιώνουμε ότι όλα τα υλικά συμμορφώνονται με τις προδιαγραφές που περιγράφονται στο Πιστοποιητικό Ανάλυσης ή/και στο Φύλλο Προϊόντος

Για πλήρεις λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Δήλωση εγγύησης