U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 is een genoom-bewerkte menselijke osteosarcoomcellijn afgeleid van U2OS-cellen waarin het endogene SEH1L (SEH1)-gen is gemodificeerd met behulp van CRISPR/Cas9-technologie om een in-frame SNAPf-tag te coderen. SEH1 is een onderdeel van het Y-complex (ook bekend als het NUP107-160-complex), een kernstructuurmodule van het nucleaire poriecomplex (NPC) die bijdraagt aan de assemblage en stabiliteit van het poriënraamwerk. Door de SNAPf-coderende sequentie op de endogene locus in te voegen, wordt het gemerkte SEH1-eiwit onder natuurlijke regulerende controle tot expressie gebracht, waardoor de fysiologische expressieniveaus behouden blijven en verstoringen van de samenstelling van de nucleaire poriën tot een minimum worden beperkt.

De SNAPf-tag is een gemanipuleerde, snel reagerende variant van de SNAP-tag die covalent bindt aan benzylguanine-geconjugeerde substraten, waardoor selectieve en stabiele fluorescerende labeling in levende of gefixeerde cellen mogelijk is. In U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-cellen lokaliseert het fusie-eiwit zich in de kernmembraan in een puntvormig patroon dat kenmerkend is voor de NPC-distributie. Omdat de labeling plaatsvindt op endogeen eiwitniveau, is dit systeem zeer geschikt voor kwantitatieve fluorescentiemicroscopie, superresolutiebeeldvorming en single-particle tracking-analyses gericht op het ontleden van de NPC-organisatie en stoichiometrie. De vlakke morfologie en grote kernen van U2OS-cellen vergemakkelijken bovendien de visualisatie met hoge resolutie van nucleaire envelopstructuren.

SEH1 neemt deel aan de biogenese van NPC's en is ook betrokken bij kinetochore-gerelateerde processen tijdens mitose. Deze cellijn biedt dan ook een robuust platform voor onderzoek naar de celcyclusafhankelijke assemblage en desassemblage van NPC's, de ruimtelijke organisatie van het Y-complex binnen het poriënraamwerk en de mogelijke dubbele rol van SEH1 bij de kernmembraan en mitotische kinetochoren. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 maakt mechanistisch onderzoek mogelijk naar de architectuur en dynamica van nucleaire poriën onder fysiologisch relevante expressieomstandigheden.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring