U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 הוא קו תאים של אוסטאוסרקומה אנושית שעבר עריכת גנום, שמקורו בתאי U2OS, בהם הגן האנדוגני SEH1L (SEH1) שונה באמצעות טכנולוגיית CRISPR/Cas9 כדי לקודד תגית SNAPf בתוך המסגרת. SEH1 הוא מרכיב במתחם Y (הידוע גם כמתחם NUP107-160), מודול מבני מרכזי במתחם נקבוביות הגרעין (NPC) התורם להרכבת שלד הנקבוביות וליציבותן. על ידי החדרת רצף הקוד SNAPf בלוקוס האנדוגני, החלבון SEH1 המתויג מתבטא תחת בקרה רגולטורית טבעית, תוך שמירה על רמות ביטוי פיזיולוגיות ומזעור הפרעות בהרכב נקבוביות הגרעין.

התג SNAPf הוא גרסה מהונדסת ומהירה של תג SNAP, הקושרת באופן קוולנטי מצעים מצומדים לבנזילגואנין, ומאפשרת תיוג פלואורסצנטי סלקטיבי ויציב בתאים חיים או קבועים. בתאי U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, החלבון הממוזג מתמקם במעטפת הגרעין בתבנית נקודתית האופיינית להפצת NPC. מכיוון שהתיוג מתרחש ברמות החלבון האנדוגניות, מערכת זו מתאימה היטב למיקרוסקופיה פלואורסצנטית כמותית, הדמיה ברזולוציה גבוהה וניתוח מעקב אחר חלקיקים בודדים שמטרתם לנתח את ארגון ה-NPC ואת הסטויכומטריה שלו. המורפולוגיה השטוחה והגרעינים הגדולים של תאי U2OS מקלים עוד יותר על הדמיה ברזולוציה גבוהה של מבני מעטפת הגרעין.

SEH1 משתתף בביוגנזה של NPC ומעורב גם בתהליכים הקשורים לקינטוכור במהלך המיטוזה. בהתאם לכך, קו תאים זה מספק פלטפורמה איתנה לחקר הרכבה ופירוק של NPC התלויים במחזור התא, הארגון המרחבי של קומפלקס Y בתוך שלד הנקבוביות, והתפקידים הכפולים הפוטנציאליים של SEH1 במעטפת הגרעין ובקינטוכורים המיטוטיים. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 מאפשר מחקרים מכניים של הארכיטקטורה והדינמיקה של נקבוביות גרעיניות בתנאי ביטוי רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו