U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1は、U2OS細胞由来のゲノム編集ヒト骨肉腫細胞株であり、内因性SEH1L（SEH1）遺伝子がCRISPR/Cas9技術を用いて改変され、フレーム内SNAPfタグをコードするようにされている。 SEH1は核膜孔複合体（NPC）のコア構造モジュールであるY複合体（別名NUP107-160複合体）の構成要素であり、孔の骨格構築と安定性に寄与する。内因性遺伝子座にSNAPfコード配列を挿入することで、タグ付きSEH1タンパク質は生体内の調節機構下で発現され、生理的発現レベルを維持しつつ核膜孔構成への影響を最小限に抑える。

SNAPfタグは、ベンジルグアニン結合基を有する基質と共有結合する、SNAPタグの高速反応型改変体である。これにより生細胞・固定細胞において選択的かつ安定な蛍光標識が可能となる。U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1細胞では、融合タンパク質が核膜上にNPC分布に特徴的な点状パターンで局在する。 標識が内因性タンパク質レベルで行われるため、このシステムは核膜孔の組織化と化学量論を解明する定量的蛍光顕微鏡法、超解像イメージング、単粒子追跡解析に最適である。U2OS細胞の平坦な形態と大きな核は、核膜構造の高解像度可視化をさらに容易にする。

SEH1は核孔複合体（NPC）の生合成に関与し、有糸分裂時の動原体関連プロセスにも関与していることが示唆されている。したがって、この細胞株は、細胞周期依存的なNPCの組立・分解、孔構造内におけるY複合体の空間的組織化、ならびに核膜および有糸分裂動原体におけるSEH1の潜在的な二重の役割を調査するための強力なプラットフォームを提供する。 U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1は、生理的に関連性のある発現条件下における核孔構造と動態の機序研究を可能にする。

37℃、5%_CO2、加湿雰囲気。

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

長期保存の場合、バイアルを-150～-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

サイシオンは、製品の品質と生存率を保証します。 当社では、培養を開始した時点で、当社施設からの出荷後60日間、細胞が生存可能であることを保証しています。 すべての材料が、分析証明書および／または製品シートに記載された仕様に適合していることを保証します。

詳細については、<a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Warranty Statement をご参照ください。