U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 er en genomredigert human osteosarkomcellelinje avledet fra U2OS-celler, hvor det endogene SEH1L (SEH1)-genet er modifisert ved hjelp av CRISPR/Cas9-teknologi for å kode for en in-frame SNAPf-tag. SEH1 er en komponent i Y-komplekset (også kjent som NUP107-160-komplekset), en sentral strukturmodul i kjerneporekomplekset (NPC) som bidrar til porestativets sammensetning og stabilitet. Ved å sette inn SNAPf-kodingssekvensen på det endogene lokuset, uttrykkes det merkede SEH1-proteinet under naturlig regulatorisk kontroll, noe som bevarer fysiologiske ekspresjonsnivåer og minimerer forstyrrelser i kjerneporenes sammensetning.

SNAPf-taggen er en konstruert, hurtigvirkende variant av SNAP-taggen som kovalent binder benzylguaninkonjugerte substrater, noe som muliggjør selektiv og stabil fluorescerende merking i levende eller fiksert celler. I U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-celler lokaliseres fusjonsproteinet til kjernemembranen i et punktformet mønster som er karakteristisk for NPC-fordelingen. Fordi merking skjer på endogene proteinnivåer, er dette systemet godt egnet for kvantitativ fluorescensmikroskopi, superoppløsningsavbildning og enkeltpartikkel-sporingsanalyser med sikte på å dissekere NPC-organisasjon og støkiometri. Den flate morfologien og de store kjernene i U2OS-celler letter ytterligere høyoppløselig visualisering av kjernemembranstrukturer.

SEH1 deltar i NPC-biogenese og har også vært involvert i kinetokorrelaterte prosesser under mitose. Følgelig gir denne cellelinjen en robust plattform for å undersøke cellecyklusavhengig NPC-montering og demontering, romlig organisering av Y-komplekset innenfor porestrukturen og potensielle doble roller for SEH1 ved kjernemembranen og mitotiske kinetokorer. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 muliggjør mekanistiske studier av kjerneporenes arkitektur og dynamikk under fysiologisk relevante ekspresjonsforhold.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring