U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 er en genomredigert human osteosarkomcellelinje avledet fra U2OS-celler, hvor det endogene RANBP2-lokuset (også kjent som NUP358) er modifisert ved hjelp av CRISPR/Cas9 for å kode for et SNAPf-merke i rammen med det naturlige proteinet. Nup358/RanBP2 er et stort nukleoporin lokalisert til cytoplasmatiske filamenter i kjerneporekomplekset (NPC) og spiller en avgjørende rolle i nukleocytoplasmatisk transport, SUMOylering og mitotiske prosesser. Endogen merking sikrer at SNAPf-Nup358 uttrykkes under fysiologisk promotorkontroll, opprettholder naturlige ekspresjonsnivåer og minimerer artefakter assosiert med overekspresjonssystemer.

SNAPf-taggen er en hurtigmerkingsvariant av SNAP-taggen som kovalent binder benzylguaninkonjugerte substrater, noe som muliggjør selektiv og stabil fluorescerende merking av Nup358 i levende eller fiksert celler. I U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2-celler lokaliseres fusjonsproteinet til kjernemembranen i en punktformet fordeling som er karakteristisk for cytoplasmatiske NPC-filamenter. Denne konfigurasjonen støtter høyoppløselig fluorescensavbildning, superoppløselig mikroskopi, puls-jakt-merking og enkeltmolekylsporing for å studere NPC-arkitektur og -dynamikk. Den flate morfologien og de store kjernene i U2OS-celler letter ytterligere kvantitativ avbildning av kjernemembranstrukturer.

Denne modellen muliggjør undersøkelse av Nup358-spesifikke roller i CRM1/eksportinavhengig nukleær eksport, Ran GTPase-syklusregulering og den romlige organiseringen av cytoplasmatiske transportplattformer. Gitt Nup358s involvering i mitotisk spindelmontering og kinetokorfunksjon, er cellelinjen også egnet for å studere cellecyklusavhengig omfordeling av nukleoporiner og NPC-demontering/remontering under mitose. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 gir en fysiologisk relevant plattform for å dissekere strukturelle og funksjonelle aspekter av den cytoplasmatiske siden av kjerneporekomplekset i humane celler.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring