U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 es una línea celular de osteosarcoma humano editada genómicamente, derivada de células U2OS, en la que el locus endógeno de RANBP2 (también conocida como NUP358) ha sido modificado mediante CRISPR/Cas9 para codificar una etiqueta SNAPf en marco de lectura con la proteína nativa. Nup358/RanBP2 es una nucleoporina de gran tamaño localizada en los filamentos citoplasmáticos del complejo de poros nucleares (NPC) y desempeña funciones críticas en el transporte nucleocitoplasmático, la SUMOilación y los procesos mitóticos. El etiquetado endógeno garantiza que SNAPf-Nup358 se exprese bajo el control de un promotor fisiológico, lo que mantiene los niveles de expresión nativos y minimiza los artefactos asociados con los sistemas de sobreexpresión.

La etiqueta SNAPf es una variante de marcaje rápido de la etiqueta SNAP que se une covalentemente a sustratos conjugados con bencilguanina, lo que permite el marcaje fluorescente selectivo y estable de Nup358 en células vivas o fijadas. En las células U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2, la proteína de fusión se localiza en la envoltura nuclear con una distribución punteada característica de los filamentos citoplasmáticos del NPC. Esta configuración permite el uso de imágenes de fluorescencia de alta resolución, microscopía de superresolución, marcaje de pulso-persecución y técnicas de seguimiento de moléculas individuales para estudiar la arquitectura y la dinámica del NPC. La morfología plana y los núcleos grandes de las células U2OS facilitan aún más la obtención de imágenes cuantitativas de las estructuras de la envoltura nuclear.

Este modelo permite investigar las funciones específicas de Nup358 en la exportación nuclear dependiente de CRM1/exportina, la regulación del ciclo de la GTPasa Ran y la organización espacial de las plataformas de transporte citoplasmático. Dada la participación de Nup358 en el ensamblaje del huso mitótico y la función del cinetocoro, la línea celular también es adecuada para estudiar la redistribución de las nucleoporinas dependiente del ciclo celular y el desmontaje/reensamblaje del NPC durante la mitosis. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 ofrece una plataforma fisiológicamente relevante para analizar los aspectos estructurales y funcionales de la cara citoplasmática del complejo de poros nucleares en células humanas.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.