U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 on genoomi redigeeritud inimese osteosarkoomi rakuliin, mis on saadud U2OS rakkudest, milles endogeenne RANBP2 (tuntud ka kui NUP358) lokus on modifitseeritud CRISPR/Cas9 abil, et kodeerida SNAPf-märgistust raami sees koos loodusliku valgu. Nup358/RanBP2 on suur nukleoporiin, mis asub tuumapoorikompleksi (NPC) tsütoplasmaatilistes filamentides ja mängib olulist rolli nukleotsütoplasmaatilises transportis, SUMOülatsioonis ja mitootilistes protsessides. Endogeenne märgistamine tagab, et SNAPf-Nup358 ekspresseerub füsioloogilise promootori kontrolli all, säilitades loomuliku ekspressioonitaseme ja minimeerides üleespressioonisüsteemidega seotud artefakte.

SNAPf-märgis on SNAP-märgise kiire märgistamise variant, mis seondub kovalentselt bentsüülguaniiniga konjugeeritud substraatidega, võimaldades Nup358 selektiivset ja stabiilset fluorestsentsmärgistamist elusates või fikseeritud rakkudes. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 rakkudes lokaliseerub fusioonvalk tuumaümbrise punktilise jaotumisega, mis on iseloomulik tsütoplasmaatilistele NPC filamentidele. See konfiguratsioon toetab kõrge resolutsiooniga fluorestsentskujutist, superresolutsioonilist mikroskoopiat, impulss-jälgimise märgistamist ja ühe molekuli jälgimise meetodeid NPC arhitektuuri ja dünaamika uurimiseks. U2OS rakkude lame morfoloogia ja suured tuumad hõlbustavad veelgi tuumaümbrise struktuuride kvantitatiivset kujutamist.

See mudel võimaldab uurida Nup358-spetsiifilisi rolle CRM1/eksportiinist sõltuvas tuuma ekspordis, Ran GTPase tsükli regulatsioonis ja tsütoplasmaatiliste transpordialuste ruumilises korralduses. Arvestades Nup358 osalemist mitootilise varda kokkupanekus ja kinetokooride funktsioonis, sobib rakuliin ka rakkude tsüklist sõltuva nukleoporiinide ümberjaotumise ja NPC lahtimonteerimise/taasmonteerimise uurimiseks mitoosi ajal. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 pakub füsioloogiliselt asjakohast platvormi inimrakkude tuumapoorikompleksi tsütoplasmaatilise pinna struktuuriliste ja funktsionaalsete aspektide analüüsimiseks.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest