U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP on genoomi muundatud inimese osteosarkoomi rakuliin, mis on saadud U2OS rakkudest, milles endogeenne TPR (Translocated Promoter Region) geen on muundatud CRISPR/Cas9 tehnoloogia abil, et kodeerida in-frame SNAP-märgistust. TPR on suur spiraalselt keerutatud nukleoporiin, mis lokaliseerub tuumapoorikompleksi (NPC) tuumapoolsel küljel asuvasse tuumakorvi. TPR-i märgistamisega selle endogeenses lokuses ekspresseeritakse fusioonvalku loomuliku regulatiivse kontrolli all, säilitades füsioloogilised ekspressioonitasemed ja tagades nõuetekohase inkorporeerumise tuumakorvi struktuuri.

SNAP-märgis võimaldab TPR-i kovalentse märgistamist bentsüülguaniiniga konjugeeritud fluorestsentssubstraatidega elusates või fikseeritud rakkudes, võimaldades väga spetsiifilist ja stabiilset visualiseerimist. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP rakkudes näitab märgistatud TPR tuumaümbrise juures iseloomulikku punktitaolist ringikujulist jaotust, mis vastab NPC-ga seotud tuumakorvi struktuuridele. See süsteem sobib hästi kvantitatiivseks fluorestsentsmikroskoopiasse, ülikõrge resolutsiooniga pildistamiseks, impulss-jälgimise märgistamiseks ja tuumakorvi kokkupaneku ja käibe dünaamiliseks uurimiseks. U2OS rakkude lame morfoloogia ja suured tuumad hõlbustavad tuumaümbrise struktuuride kõrge resolutsiooniga pildistamist.

TPR mängib olulist rolli mRNA ekspordis, tuuma transpordi reguleerimises, kromatiini organiseerimises tuuma äärealal ja genoomi ruumilises organiseerimises. TPR on seotud ka tuuma transpordiga seotud alajaotuste moodustumise ja heterokromatiini välistamisega tuuma pooridega seotud piirkondadest. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP pakub füsioloogiliselt asjakohast mudelit tuumakorvi arhitektuuri ja dünaamika analüüsimiseks, tuumatsütoplasma transpordimehhanismide uurimiseks ja tuumakestaga seotud kromatiini interaktsioonide uurimiseks endogeensete ekspressioonitingimuste korral.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest