U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP är en genredigerad human osteosarkomcellinje som härrör från U2OS-celler, där det endogena TPR-genet (Translocated Promoter Region) har modifierats med hjälp av CRISPR/Cas9-teknik för att koda för en in-frame SNAP-tagg. TPR är ett stort spiralformat nukleoporin som lokaliseras till kärnkorgen på nukleoplasmasidan av kärnporekomplexet (NPC). Genom att märka TPR vid dess endogena locus uttrycks fusionsproteinet under naturlig regulatorisk kontroll, vilket bevarar fysiologiska expressionsnivåer och upprätthåller korrekt inkorporering i kärnkorgen.

SNAP-taggen möjliggör kovalent märkning av TPR med bensylguaninkonjugerade fluorescerande substrat i levande eller fixerade celler, vilket möjliggör högspecifik och stabil visualisering. I U2OS-CRISPR-TPR-SNAP-celler uppvisar märkt TPR en karakteristisk punktformig ringliknande distribution vid kärnmembranet, motsvarande NPC-associerade kärnkorgenstrukturer. Detta system är väl lämpat för kvantitativ fluorescensmikroskopi, superupplösningsavbildning, puls-chase-märkning och dynamiska studier av kärnkorgenmontering och omsättning. Den plana morfologin och de stora kärnorna i U2OS-celler underlättar högupplöst avbildning av kärnmembranassocierade strukturer.

TPR spelar en avgörande roll i mRNA-export, reglering av kärntransport, kromatinorganisation vid kärnans periferi och rumslig genomorganisation. TPR är också inblandat i bildandet av kärntransportrelaterade underavdelningar och i uteslutningen av heterokromatin från kärnporassocierade regioner. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP tillhandahåller en fysiologiskt relevant modell för att analysera kärnkorgenens arkitektur och dynamik, undersöka mekanismerna för transport mellan kärnan och cytoplasman och studera interaktioner mellan kromatin och kärnmembranet under endogena expressionsförhållanden.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring