Gå direkt till innehållet
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple
Vävnad
Ben
Sjukdom
Osteosarkom

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple

Cell line · Produktnummer 300461

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple är en genetiskt modifierad osteosarkomcellinje som härstammar från den humana U-2 OS-cellinjen, känd för sin kraftiga tillväxt...

€800.00exkl. moms och frakt

Anpassning / Rekommendationer

Finns i lager
Lot
Rekommenderat (det färskaste partiet)
  • CoA
1

01Allmän information

Beskrivning

U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple är en genetiskt modifierad osteosarkomcellinje som härrör från den humana U-2 OS-cellinjen, känd för sina robusta tillväxtegenskaper och användbarhet i olika biologiska studier. Denna speciella klon har modifierats med hjälp av CRISPR/Cas9-genredigeringsteknik för att införliva mMaple, ett fotokonvertibelt fluorescerande protein, i NUP96-genen. Proteinet mMaple möjliggör avancerade avbildningstekniker såsom avbildning av levande celler och superupplösningsmikroskopi, vilket ger dynamiska insikter i kärnporskomplexets (NPC) beteende och cellulära import- och exportmekanismer genom kärnhöljet.

NUP96-genen, som kodar för en viktig komponent i NPC, är avgörande för nukleocytoplasmisk transport. Förändringar i NUP96 kan påverka inte bara transportmekanismerna utan även kärnans övergripande arkitektur och funktion. Denna cellinje fungerar därför som en utmärkt modell för att studera NPC-relaterade patologier och kärntransportens roll i cellulär metabolism och signalering. Integreringen av mMaple i NUP96 möjliggör spårning och visualisering i realtid av NUP96-dynamiken in vivo, vilket gör den till ett oumbärligt verktyg för forskare som fokuserar på studier av cellkärnor och för dem som utforskar konsekvenserna av NPC-dysfunktioner i sjukdomar som cancer och virusinfektioner.

Som ett specialiserat verktyg stöder U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple clone no.16 högupplöst bildbehandling och ger betydande data om den rumsliga och tidsmässiga fördelningen av NPC-komponenter. Den är särskilt värdefull för experiment som kräver detaljerad analys av genuttryck, proteinlokalisering och kärntransport under fysiologiska och patologiska förhållanden, vilket underlättar en djupare förståelse av cellulära processer på molekylär nivå.

Vävnad
Ben
Sjukdom
Osteosarkom

02Klassificering

Organism
Människa
Kön
Kvinna
Tillväxtegenskaper
Följsam
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-mMaple, clone 16) contains a CRISPR-mediated NUP96-mMaple fusion enabling photoconvertible labeling of nuclear pore structures. The construct is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosäkerhetsnivå
1

03Identifierare

Källa
U-2 OS-CRISPR-NUP96-mMaple (Cytion katalognummer 300461)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FK
Insättare
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

04Uttryck och mottaglighet

Proteinexpression
NUP96-mMaple (endogent kärnporskomplexprotein 96, mMaple-märkt)

05Hantering och odling

Odlingsmedium
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glukos, w: stabil Glutamin, w: 2,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% FBS, 1% NEAA
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium.
Såtäthet
1 x 104 celler/cm2
Vätskeförnyelse
2 till 3 gånger per vecka
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

07Donator

Donatorns ålder
15 år
Etnicitet
Kaukasisk