Gå direkt till innehållet
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP
Vävnad
Ben
Sjukdom
Osteosarkom

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

Cell line · Produktnummer 300444

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP är en genetiskt modifierad osteosarkomcellinje som härstammar från den ursprungliga humana cellinjen U-2 OS. Denna cellinje har modifierats...

€800.00exkl. moms och frakt
Finns i lager
Lot
Rekommenderat (det färskaste partiet)
  • CoA
1

01Allmän information

Beskrivning

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP är en genetiskt modifierad osteosarkomcellinje som härrör från den mänskliga cellinjen U-2 OS. Denna cellinje har modifierats genom CRISPR/Cas9-medierad genomredigering för att införliva en SNAP-tagg vid NUP96-genen, vilket möjliggör visualisering och studier av kärnporskomplexets dynamik. Kärnporkomplex (NPC) är avgörande för regleringen av nukleocytoplasmatisk transport, och NUP96 är en betydande komponent i NPC och spelar en central roll för dess strukturella integritet och funktion.

I U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP clone no.33 möjliggör integrationen av SNAP-taggen vid NUP96-locus specifik och kovalent fastsättning av fluorescerande substrat eller andra kemiska prober som kan användas för avbildning av levande celler och andra biokemiska analyser. Denna egenskap gör den till ett ovärderligt verktyg för att undersöka den molekylära dynamiken i nukleocytoplasmatisk transport, förstå NPC-relaterade patologier och screena för terapeutiska föreningar som påverkar NPC-funktionen. Cellinjen behåller också egenskaperna hos föräldracellinjen U-2 OS, vilket inkluderar en hög grad av genetisk stabilitet och enkel odling, vilket gör den lämplig för screening med hög genomströmning och utökade studier inom cellbiologi.

På grund av specificiteten hos modifieringen vid NUP96-genen ger U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP-klon nr 33 en unik modell för detaljerad studie av NPC-komponenter i samband med cellulär funktion och dysfunktion. Forskare kan utnyttja SNAP-tag-systemet för att selektivt och snabbt märka NUP96, vilket underlättar visualisering i realtid av NPC-dynamik under fysiologiska och patologiska förhållanden. Denna specifika klon kan fungera som en robust plattform för både grundforskning och tillämpade biomedicinska studier och bidra väsentligt till områdena cellbiologi, genetik och onkologi.

Vävnad
Ben
Sjukdom
Osteosarkom

02Klassificering

Organism
Människa
Kön
Kvinna
Tillväxtegenskaper
Följsam
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP, clone 33) contains a CRISPR-engineered NUP96-SNAP fusion facilitating SNAP-tag chemical labeling of nuclear pores. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosäkerhetsnivå
1

03Identifierare

Källa
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP (Cytion katalognummer 300444)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FL
Insättare
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

04Uttryck och mottaglighet

Proteinexpression
NUP96-SNAP (kärnporskomplexprotein 96, SNAP-tagg)

05Hantering och odling

Odlingsmedium
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glukos, w: stabil Glutamin, w: 2,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera med 10% FBS, 3,0 g/L glukos, stabil glutamin, 2,0 mM natriumpyruvat, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAA
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium.
Såtäthet
1 x 104 celler/cm2
Vätskeförnyelse
2 till 3 gånger per vecka
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

07Donator

Donatorns ålder
15 år
Etnicitet
Kaukasisk