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U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP
Cell line · Product number 300444
The U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP is a genetically modified osteosarcoma cell line derived from the parent U-2 OS human cell line. This cell line has been engi...
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01General information
- Description
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP 是一種源自親本 U-2 OS 人細胞系的基因改造骨肉瘤細胞系。 該細胞系經由 CRISPR/Cas9 介導的基因組編輯技術，在 NUP96 基因上整合了 SNAP 標籤，從而能夠對核孔複合體的動態進行可視化觀察與研究。 核孔複合體（NPC）對於調節核-細胞質運輸至關重要，而 NUP96 是 NPC 的重要組成部分，在維持其結構完整性與功能方面發揮著關鍵作用。
在 U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP 第 33 號克隆中，SNAP-tag 整合於 NUP96 基因座，可實現螢光底物或其他化學探針的特異性共價結合，這些探針可用於活細胞成像及其他生化檢測。 此特性使其成為研究核-細胞質運輸分子動力學、理解與 NPC 相關的病理現象，以及篩選影響 NPC 功能的治療化合物之不可或缺的工具。 該細胞系亦保留了親本 U-2 OS 細胞系的特性，包括高度的遺傳穩定性及易於培養，使其適合用於高通量篩選及細胞生物學的深入研究。
由於 NUP96 基因的修飾具有特異性，U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP 第 33 號克隆為在細胞功能與功能失調背景下詳細研究 NPC 組成部分提供了一個獨特的模型。 研究人員可利用 SNAP-tag 系統，選擇性地快速標記 NUP96，從而便於在生理及病理條件下即時觀察核孔複合體（NPC）的動態變化。此特定克隆可作為基礎研究與應用生物醫學研究的堅實平台，對細胞生物學、遺傳學及腫瘤學領域做出重大貢獻。
- Tissue
- 骨頭
- Disease
- 骨肉瘤
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP, clone 33) contains a CRISPR-engineered NUP96-SNAP fusion facilitating SNAP-tag chemical labeling of nuclear pores. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Identifiers
- Citation
- U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP（Cytion 型號 300444）
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_B7FL
- Depositor
- 艾倫伯格實驗室（EMBL）
04Expression and susceptibility
- Protein expression
- NUP96-SNAP（核孔複合體蛋白 96，SNAP-tag）
05Handling and culture
- Culture medium
- 麥考伊 5a 培養基，含：3.0 g/L 葡萄糖，含：穩定型谷氨酰胺，含：2.0 mM 丙酮酸鈉，含：2.2 g/L NaHCO₃（Cytion 產品編號 820200a）
- Incubation atmosphere
37°C，5% CO₂，加濕環境。
- Supplements
- 在培養基中加入 10% FBS、3.0 g/L 葡萄糖、穩定型谷氨醯胺、2.0 mM 丙酮酸鈉、2.2 g/L NaHCO₃ 以及 1% NEAA
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 從貼壁細胞中移除舊培養基，並用不含鈣和鎂的PBS洗滌細胞。T25培養瓶使用3-5毫升PBS，T75培養瓶則使用5-10毫升。 接著，用 Accutase 完全覆蓋細胞，T25 培養瓶使用 1–2 毫升，T75 培養瓶則使用 2.5 毫升。將細胞於室溫下孵育 8–10 分鐘，使其脫附。 孵育後，將細胞與 10 毫升培養基輕柔混合以使其重新懸浮，然後以 300xg 離心 3 分鐘。棄去上清液，將細胞重新懸浮於新鮮培養基中，並轉移至已預先加入新鮮培養基的新培養瓶中。
- Seeding density
- 1 × 10⁴ 個細胞/cm²
- Fluid renewal
- 每週 2 至 3 次
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
06Quality control and cryopreservation
- Sterility
透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。
為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。
- Freeze medium
- 作為冷凍保存培養基，我們使用完全生長培養基（含 FBS）+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率，或使用 CM-1 （Cytion 型號 800100），該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑，可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
- Storage conditions
若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。
- Shipping conditions
冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。
07Donor
- Donor age
- 15年
- Ethnicity
- 高加索人
08Legal and safety
- Safety precautions
- 若計劃將低溫試管存放在液態氮中以供日後解凍，必須嚴格遵守相關安全措施。 必須穿戴適當的防護手套和防護服，且在將冷凍樣本移入或移出液氮罐時，必須佩戴口罩或安全護目鏡。此舉旨在降低因取出時冷凍試管可能發生爆炸而導致受傷的風險，此類爆炸可能造成尖銳碎片飛濺。
- Warranty
在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。
詳情請參閱我們的 《保固聲明》。
- Third-party agreements apply
- Yes
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