U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

A U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP é uma linhagem celular de osteossarcoma geneticamente modificada, derivada da linhagem celular humana parental U-2 OS. Essa linhagem celular foi modificada por meio da edição do genoma mediada por CRISPR/Cas9 para incorporar uma etiqueta SNAP no gene NUP96, permitindo a visualização e o estudo da dinâmica do complexo de poros nucleares. Os complexos de poros nucleares (NPCs) são cruciais para a regulação do transporte nucleocitoplasmático, e o NUP96 é um componente significativo do NPC, desempenhando um papel fundamental em sua integridade estrutural e função.

No clone nº 33 da linha U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP, a integração da SNAP-tag no locus do NUP96 permite a ligação específica e covalente de substratos fluorescentes ou outras sondas químicas que podem ser utilizadas para imagens de células vivas e outros ensaios bioquímicos. Essa característica torna-a uma ferramenta inestimável para investigar a dinâmica molecular do transporte nucleocitoplasmático, compreender patologias relacionadas ao NPC e selecionar compostos terapêuticos que afetem a função do NPC. A linhagem celular também mantém as características da linhagem parental U-2 OS, o que inclui um alto nível de estabilidade genética e facilidade de cultura, tornando-a adequada para triagem de alto rendimento e estudos aprofundados em biologia celular.

Devido à especificidade da modificação no gene NUP96, o clone nº 33 da U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP oferece um modelo único para o estudo detalhado dos componentes do NPC no contexto da função e disfunção celular. Os pesquisadores podem utilizar o sistema SNAP-tag para marcar seletiva e rapidamente o NUP96, facilitando a visualização em tempo real da dinâmica do NPC em condições fisiológicas e patológicas. Esse clone específico pode servir como uma plataforma robusta tanto para pesquisa básica quanto para estudos biomédicos aplicados, contribuindo significativamente para os campos da biologia celular, genética e oncologia.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.