Pāriet uz saturu
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP
Audums
Bone
Slimība
Osteosarkoma

Dokumenti

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

Cell line · Preces numurs 300444

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP ir ģenētiski modificēta osteosarkomas šūnu līnija, kas iegūta no sākotnējās cilvēka šūnu līnijas U-2 OS. Šī šūnu līnija ir ģenētiski modificēta...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP ir ģenētiski modificēta osteosarkomas šūnu līnija, kas iegūta no cilvēka cilmes U-2 OS šūnu līnijas. Šī šūnu līnija ir pārveidota, izmantojot CRISPR/Cas9 mediētu genoma rediģēšanu, iekļaujot NUP96 gēnu ar SNAP marķējumu, kas ļauj vizualizēt un pētīt kodola poru kompleksa dinamiku. Kodola poru kompleksiem (NPC) ir izšķiroša nozīme nukleoplazmas transporta regulēšanā, un NUP96 ir nozīmīga NPC sastāvdaļa, kurai ir izšķiroša nozīme tā strukturālajā integritātē un funkcijās.

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP klona Nr. 33 U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP klona Nr. 33 SNAP marķējuma integrācija NUP96 lokusā ļauj specifiski un kovalentā veidā pievienot fluorescējošus substrātus vai citas ķīmiskas zondes, ko var izmantot dzīvu šūnu attēlveidošanai un citiem bioķīmiskiem testiem. Šī īpašība padara to par nenovērtējamu rīku nukleocitoplazmas transporta molekulārās dinamikas izpētei, ar NPC saistītu patoloģiju izpratnei un terapeitisko savienojumu, kas ietekmē NPC funkciju, skrīningam. Šūnu līnija saglabā arī vecāku U-2 OS līnijas īpašības, kas ietver augstu ģenētiskās stabilitātes līmeni un ērtu kultivēšanu, padarot to piemērotu augstas veiktspējas skrīningam un plašākiem pētījumiem šūnu bioloģijā.

Pateicoties modifikācijas specifiskumam NUP96 gēnā, U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP klons Nr. 33 ir unikāls modelis detalizētai NPC komponentu izpētei šūnu funkciju un disfunkcijas kontekstā. Pētnieki var izmantot SNAP marķēšanas sistēmu, lai selektīvi un ātri marķētu NUP96, atvieglojot NPC dinamikas vizualizāciju reāllaikā fizioloģiskos un patoloģiskos apstākļos. Šis īpašais klons var kalpot kā stabila platforma gan fundamentāliem pētījumiem, gan lietišķiem biomedicīnas pētījumiem, sniedzot nozīmīgu ieguldījumu šūnu bioloģijas, ģenētikas un onkoloģijas jomās.

Audums
Bone
Slimība
Osteosarkoma

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP, clone 33) contains a CRISPR-engineered NUP96-SNAP fusion facilitating SNAP-tag chemical labeling of nuclear pores. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Identifikatori

Atsauce
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP (Cytion kataloga numurs 300444)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FL
noguldītājs
Ellenberga laboratorija (EMBL)

04Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
NUP96-SNAP (kodola poru kompleksa olbaltumviela 96, SNAP birka)

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
McCoys 5a, w: 3,0 g/l glikoze, w: stabils glutamīns, w: 2,0 mM nātrija piruvāts, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820200a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS, 3,0 g/l glikozes, stabilu glutamīnu, 2,0 mM nātrija piruvāta, 2,2 g/l NaHCO3, 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
15 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis