U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

A U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP é uma linha celular de osteossarcoma geneticamente modificada derivada da linha celular humana U-2 OS. Esta linha celular foi modificada através da edição do genoma mediada por CRISPR/Cas9 para incorporar um marcador SNAP no gene NUP96, permitindo a visualização e o estudo da dinâmica do complexo de poros nucleares. Os complexos de poros nucleares (NPCs) são cruciais para a regulação do transporte nucleocitoplasmático, e o NUP96 é um componente significativo do NPC, desempenhando um papel fundamental na sua integridade estrutural e função.

No clone U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP n.º 33, a integração do SNAP-tag no locus NUP96 permite a ligação específica e covalente de substratos fluorescentes ou outras sondas químicas que podem ser utilizadas para imagiologia de células vivas e outros ensaios bioquímicos. Esta caraterística torna-a uma ferramenta inestimável para a investigação da dinâmica molecular do transporte nucleocitoplasmático, para a compreensão das patologias relacionadas com as NPC e para o rastreio de compostos terapêuticos que afectam a função das NPC. A linha celular também mantém as caraterísticas da linha parental U-2 OS, o que inclui um elevado nível de estabilidade genética e facilidade de cultura, tornando-a adequada para o rastreio de elevado rendimento e estudos alargados em biologia celular.

Devido à especificidade da modificação no gene NUP96, o clone U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP n.º 33 constitui um modelo único para o estudo pormenorizado dos componentes do NPC no contexto da função e disfunção celular. Os investigadores podem explorar o sistema SNAP-tag para marcar selectiva e rapidamente o NUP96, facilitando a visualização em tempo real da dinâmica do NPC em condições fisiológicas e patológicas. Este clone específico pode servir como uma plataforma robusta tanto para a investigação básica como para estudos biomédicos aplicados, contribuindo significativamente para os domínios da biologia celular, genética e oncologia.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia