U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 é uma linha celular de osteossarcoma humano geneticamente modificada, derivada da linha parental U2OS, na qual o locus NUP133 endógeno foi modificado usando edição do genoma mediada por CRISPR/Cas9 para codificar uma etiqueta SNAPf C-terminal. O NUP133 é um componente central do complexo Y (complexo NUP107-160), um subcomplexo estrutural essencial para a montagem e manutenção do complexo de poros nucleares (NPC). Ao introduzir a sequência de codificação SNAPf no locus endógeno, a proteína de fusão é expressa sob controlo regulatório nativo, preservando os níveis de expressão fisiológica e a localização subcelular.

A etiqueta SNAPf é uma variante de marcação rápida da etiqueta SNAP, uma O6-alquilguanina-DNA alquiltransferase projetada que reage covalentemente com substratos conjugados com benzilguanina. Isso permite a marcação fluorescente altamente específica e versátil de Nup133 em células vivas ou fixas usando substratos SNAP permeáveis ou impermeáveis às células. Nas células U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133, a proteína de fusão localiza-se no envelope nuclear num padrão pontilhado característico dos complexos de poros nucleares. Como a marcação ocorre no locus endógeno, a estequiometria e a arquitetura do NPC são minimamente perturbadas, tornando este modelo adequado para microscopia quantitativa de super-resolução, rastreamento de moléculas únicas e análises cinéticas da montagem e renovação do NPC.

Esta linha celular fornece uma plataforma robusta para o estudo do transporte nuclear, da dinâmica do tráfego nucleocitoplasmático, da biogênese do NPC durante a interfase e a remontagem nuclear pós-mitótica e da organização estrutural do complexo Y dentro da estrutura do poro. O fundo U2OS oferece morfologia plana e núcleos grandes, facilitando a imagem de alta resolução. As células U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 são particularmente adequadas para experiências de marcação pulse-chase, microscopia correlativa de luz e eletrónica e abordagens de imagem multicoloridas em combinação com nucleoporinas ou fatores de transporte endógenos marcados adicionalmente.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia