U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 yra genetiškai modifikuota žmogaus osteosarkomos ląstelių linija, gauta iš tėvinės U2OS linijos, kurioje endogeninis NUP133 lokusas buvo modifikuotas naudojant CRISPR/Cas9 mediatorių genomo redagavimą, kad būtų užkoduotas C-terminalinis SNAPf žymeklis. NUP133 yra pagrindinis Y-komplekso (NUP107-160 kompleksas) komponentas, struktūrinis subkompleksas, būtinas branduolinio porų komplekso (NPC) surinkimui ir palaikymui. Įvedant SNAPf kodavimo seką į endogeninį lokusą, jungtinis baltymas yra ekspresuojamas pagal natūralią reguliacinę kontrolę, išlaikant fiziologinius ekspresijos lygius ir subceliulinę lokalizaciją.

SNAPf žymė yra greito žymėjimo variantas SNAP žymės, inžinerinio O6-alkilguanino-DNR alkiltransferazės, kuri kovalentiškai reaguoja su benzilguaninu konjuguotais substratais. Tai leidžia labai specifiškai ir įvairiapusiškai fluorescenciniu būdu žymėti Nup133 gyvose arba fiksuotose ląstelėse, naudojant ląstelių pralaidžius arba nepralaidžius SNAP substratus. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 ląstelėse jungtinis baltymas lokalizuojasi branduolinėje apvalkale, būdingame branduolinių porų kompleksams. Kadangi žymėjimas vyksta endogeniniame lokuse, NPC stechiometrija ir architektūra yra minimaliai sutrikdyta, todėl šis modelis tinka kiekybinei superrezoliucijos mikroskopijai, vienos molekulės sekimui ir NPC surinkimo bei apykaitos kinetinei analizei.

Ši ląstelių linija suteikia tvirtą platformą branduolinio transporto, branduolinio-citoplazminio transporto dinamikos, NPC biogenezės interfazės metu ir postmitotinio branduolinio surinkimo bei Y-komplekso struktūrinės organizacijos porų karkase tyrimams. U2OS fonas pasižymi plokščia morfologija ir dideliais branduoliais, palengvinančiais aukštos skiriamosios gebos vaizdų gavimą. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 ląstelės ypač tinka impulsų-persekiojimo žymėjimo eksperimentams, koreliatyvinei šviesos ir elektronų mikroskopijai bei daugiakolorėms vaizdų gavimo metodikoms, derinamoms su papildomais endogeniškai pažymėtais nukleoporinais arba transporto veiksniais.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime