U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 är en genetiskt modifierad human osteosarkomcellinje som härstammar från den ursprungliga U2OS-bakgrunden, där den endogena NUP133-lokusen har modifierats med hjälp av CRISPR/Cas9-medierad genomredigering för att koda en C-terminal SNAPf-tagg. NUP133 är en kärnkomponent i Y-komplexet (NUP107-160-komplexet), ett strukturellt subkomplex som är viktigt för montering och underhåll av kärnporekomplexet (NPC). Genom att införa SNAPf-kodningssekvensen in-frame vid den endogena lokusen uttrycks fusionsproteinet under naturlig regulatorisk kontroll, vilket bevarar fysiologiska expressionsnivåer och subcellulär lokalisering.

SNAPf-taggen är en snabbmärkningsvariant av SNAP-taggen, en konstruerad O6-alkylguanin-DNA-alkyltransferas som reagerar kovalent med bensylguaninkonjugerade substrat. Detta möjliggör högspecifik och mångsidig fluorescerande märkning av Nup133 i levande eller fixerade celler med hjälp av cellpermeabla eller impermeabla SNAP-substrat. I U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-celler lokaliseras fusionsproteinet till kärnmembranet i ett punktmönster som är karakteristiskt för kärnporekomplex. Eftersom märkningen sker vid den endogena lokusen störs NPC-stökiometrin och arkitekturen minimalt, vilket gör denna modell lämplig för kvantitativ superupplösningsmikroskopi, spårning av enskilda molekyler och kinetiska analyser av NPC-montering och omsättning.

Denna cellinje utgör en robust plattform för studier av kärntransport, nukleocytoplasmatisk transportdynamik, NPC-biogenes under interfase och postmitotisk kärnåteruppbyggnad samt strukturell organisation av Y-komplexet inom porstommen. U2OS-bakgrunden erbjuder platt morfologi och stora kärnor, vilket underlättar högupplöst avbildning. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133-celler är särskilt väl lämpade för puls-chase-märkningsexperiment, korrelativ ljus- och elektronmikroskopi samt flerfärgsavbildningsmetoder i kombination med ytterligare endogent märkta nukleoporiner eller transportfaktorer.

37°C, 5%_CO2, befuktad atmosfär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet

För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring