U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 ir ģenētiski modificēta cilvēka osteosarkomas šūnu līnija, kas iegūta no vecāku U2OS fona, kurā endogēnais NUP133 lokuss ir modificēts, izmantojot CRISPR/Cas9 mediētu genoma rediģēšanu, lai kodētu C-terminālo SNAPf tagu. NUP133 ir Y-kompleksa (NUP107-160 kompleksa) galvenā sastāvdaļa, strukturāls subkomplekss, kas ir būtisks kodola poru kompleksa (NPC) veidošanai un uzturēšanai. Ieviešot SNAPf kodējošo sekvenci endogēnajā lokusā, fūzijas proteīns tiek ekspresēts dabiskā regulatīvā kontrolē, saglabājot fizioloģiskos ekspresijas līmeņus un subcelulāro lokalizāciju.

SNAPf tag ir ātrs marķēšanas variants SNAP-tag, inženierijas O6-alkilguanīna-DNS alkiltransferāzei, kas kovalenti reaģē ar benzilguanīna konjugētiem substrātiem. Tas ļauj veikt ļoti specifisku un daudzpusīgu Nup133 fluorescento marķēšanu dzīvos vai fiksētos šūnos, izmantojot šūnu caurlaidīgus vai necaurlaidīgus SNAP substrātus. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 šūnās fūzijas proteīns lokalizējas kodola apvalkā punktveida modelī, kas ir raksturīgs kodola poru kompleksiem. Tā kā marķēšana notiek endogēnā lokusā, NPC stehiometrija un arhitektūra tiek minimāli traucēta, padarot šo modeli piemērotu kvantitatīvai superizšķirtspējas mikroskopijai, vienmolekulu izsekošanai un NPC montāžas un apgrozījuma kinētiskai analīzei.

Šī šūnu līnija nodrošina stabilu platformu kodola transporta, nukleocitoplazmatiskās satiksmes dinamikas, NPC biogēzes interfāzes un postmitotiskās kodola atkārtotās montāžas laikā, kā arī Y-kompleksa strukturālās organizācijas poru skeleta ietvaros pētīšanai. U2OS fons piedāvā plakanu morfoloģiju un lielus kodolus, kas atvieglo augstas izšķirtspējas attēlveidošanu. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 šūnas ir īpaši piemērotas impulsu-pakaļdzīšanas marķēšanas eksperimentiem, korelatīvai gaismas un elektronu mikroskopijai un daudzkrāsu attēlveidošanas pieejām kombinācijā ar papildu endogēni marķētiem nukleoporīniem vai transporta faktoriem.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu