U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 on geneetiliselt muundatud inimese osteosarkoomi rakuliin, mis on saadud vanemlikust U2OS-taustast, kus endogeenne NUP133-lokus on muundatud CRISPR/Cas9-vahendatud genoomi redigeerimise abil, et kodeerida C-terminaalne SNAPf-märgis. NUP133 on Y-kompleksi (NUP107-160 kompleks) põhikomponent, struktuuriline alakompleks, mis on oluline tuumapooride kompleksi (NPC) kokkupanekuks ja säilitamiseks. SNAPf kodeeriva järjestuse sisseviimisega endogeensesse lokusesse ekspresseeritakse fusioonvalku loomuliku regulatsiooni kontrolli all, säilitades füsioloogilised ekspressioonitasemed ja subtsellulaarse lokaliseerumise.

SNAPf-märgis on SNAP-märgise kiire märgistamise variant, mis on insenereeritud O6-alküülguanine-DNA alküültransferaas, mis reageerib kovalentselt bentsüülguanine-konjugeeritud substraatidega. See võimaldab Nup133 väga spetsiifilist ja mitmekülgset fluorestsentsmärgistamist elusates või fikseeritud rakkudes, kasutades rakkudele läbilaskvaid või läbilaskmatuid SNAP-substraate. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 rakkudes lokaliseerub fusioonvalk tuumaümbrise punktide mustrina, mis on iseloomulik tuumapooride kompleksidele. Kuna märgistamine toimub endogeenses lokuses, on NPC stoikiomeetria ja arhitektuur minimaalselt häiritud, mistõttu see mudel sobib kvantitatiivseks üliresolutsioonilise mikroskoopia, ühe molekuli jälgimise ja NPC kokkupaneku ja käibe kineetilise analüüsi jaoks.

See rakuliin pakub tugevat platvormi tuuma transpordi, tuuma-tsütoplasma liikumise dünaamika, NPC biogeneesi interfase ja postmitotilise tuuma taaskoostumise ning Y-kompleksi struktuurilise korralduse uurimiseks pooride raamistikus. U2OS taust pakub siledat morfoloogiat ja suuri tuumi, mis hõlbustab kõrge resolutsiooniga pildistamist. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 rakud sobivad eriti hästi impulss-jälgimise märgistamise eksperimentideks, korrelatiivseks valgus- ja elektronmikroskoopiasseks ning mitmevärviliseks pildistamiseks kombinatsioonis täiendavate endogeenselt märgistatud nukleoporiinide või transportfaktoritega.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest