U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 on genoomi redigeeritud inimese osteosarkoomi rakuliin, mis on saadud U2OS rakkudest, milles endogeenne SEH1L (SEH1) geen on modifitseeritud CRISPR/Cas9 tehnoloogia abil, et kodeerida in-frame SNAPf märgistust. SEH1 on Y-kompleksi (tuntud ka kui NUP107-160 kompleks) komponent, tuumapooride kompleksi (NPC) keskne struktuurimoodul, mis aitab kaasa pooride raamistiku kokkupanekule ja stabiilsusele. SNAPf kodeeriva järjestuse sisestamisega endogeensesse lokusesse ekspresseeritakse märgistatud SEH1 valku loomuliku regulatiivse kontrolli all, säilitades füsioloogilised ekspressioonitasemed ja minimeerides tuumapooride koostise häireid.

SNAPf-märgis on SNAP-märgise insenereeritud, kiiresti reageeriv variant, mis seondub kovalentselt bentsüülguaniiniga konjugeeritud substraatidega, võimaldades selektiivset ja stabiilset fluorestsentsmärgistamist elusates või fikseeritud rakkudes. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 rakkudes lokaliseerub fusioonvalk tuumaümbrise punktide mustris, mis on iseloomulik NPC jaotusele. Kuna märgistamine toimub endogeensete valkude tasemel, sobib see süsteem hästi kvantitatiivseks fluorestsentsmikroskoopiasse, üliresolutsioonilisse pildistamisse ja ühe osakese jälgimise analüüsidesse, mille eesmärk on NPC organisatsiooni ja stoikiomeetria analüüsimine. U2OS rakkude lame morfoloogia ja suured tuumad hõlbustavad veelgi tuumaümbrise struktuuride kõrge resolutsiooniga visualiseerimist.

SEH1 osaleb NPC biogeneesis ja on seotud ka mitootiliste protsessidega, mis on seotud kinetokooridega. Seega pakub see rakuliin tugeva platvormi raku tsüklist sõltuva NPC kokkupaneku ja lahtivõtmise, Y-kompleksi ruumilise organiseerumise pooride raamistikus ning SEH1 potentsiaalse kahepoolse rolli uurimiseks tuumaümbrise ja mitootiliste kinetokooride puhul. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 võimaldab uurida tuumapooride arhitektuuri ja dünaamikat füsioloogiliselt asjakohastes ekspressioonitingimustes.

37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

Cytion seisab oma toodete kvaliteedi ja elujõulisuse eest. Me garanteerime, et meie rakud on elujõulised kasvatamise alguses 60 päeva jooksul pärast meie rajatistest saatmist. Tagame, et kõik materjalid vastavad analüüsisertifikaadis ja/või tootelehel kirjeldatud spetsifikatsioonidele

Täielikke üksikasju leiate meie <a href="""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Tagatise avaldusest