U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 — це генетично модифікована лінія клітин остеосаркоми людини, отримана з клітин U2OS, в яких ендогенний ген SEH1L (SEH1) був модифікований за допомогою технології CRISPR/Cas9 для кодування вбудованого тегу SNAPf. SEH1 є компонентом Y-комплексу (також відомого як комплекс NUP107-160), основного структурного модуля ядерного пористого комплексу (NPC), який сприяє збірці та стабільності пористої структури. Шляхом вставки кодуючої послідовності SNAPf в ендогенний локус, мічений білок SEH1 експресується під нативним регуляторним контролем, зберігаючи фізіологічні рівні експресії та мінімізуючи порушення складу ядерних пор.

Мітка SNAPf — це інженерний, швидкореагуючий варіант мітки SNAP, який ковалентно зв'язує субстрати, кон'юговані з бензилгуаніном, що дозволяє здійснювати селективне та стабільне флуоресцентне маркування в живих або фіксованих клітинах. У клітинах U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 фузійний білок локалізується в ядерній оболонці у вигляді крапчастих плям, характерних для розподілу NPC. Оскільки мічення відбувається на рівні ендогенних білків, ця система добре підходить для кількісної флуоресцентної мікроскопії, надвисокої роздільної здатності зображення та аналізу відстеження окремих частинок, спрямованих на розчленування організації та стехіометрії NPC. Плоска морфологія та великі ядра клітин U2OS ще більше полегшують візуалізацію структур ядерної оболонки з високою роздільною здатністю.

SEH1 бере участь у біогенезі NPC, а також бере участь у процесах, пов'язаних з кінетохорами під час мітозу. Відповідно, ця клітинна лінія забезпечує надійну платформу для дослідження залежного від клітинного циклу складання та розкладання NPC, просторової організації Y-комплексу в пористій структурі та потенційної подвійної ролі SEH1 у ядерній оболонці та мітотичних кінетохорах. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 дозволяє проводити механістичні дослідження архітектури та динаміки ядерних пор у фізіологічно релевантних умовах експресії.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>