U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 — це генетично модифікована лінія клітин остеосаркоми людини, отримана з клітин U2OS, в яких ендогенний локус RANBP2 (також відомий як NUP358) був модифікований за допомогою CRISPR/Cas9 для кодування мітки SNAPf в рамці з нативним білком. Nup358/RanBP2 — це великий нуклеопорин, локалізований у цитоплазматичних філаментах ядерного пористого комплексу (NPC) і відіграє важливу роль у ядерно-цитоплазматичному транспорті, SUMO-ілюванні та мітотичних процесах. Ендогенне маркування гарантує, що SNAPf-Nup358 експресується під фізіологічним контролем промотора, підтримуючи нативні рівні експресії та мінімізуючи артефакти, пов'язані з системами надмірної експресії.

Теги SNAPf — це варіант тегів SNAP, що швидко маркують і ковалентно зв'язують субстрати, кон'юговані з бензилгуаніном, що дозволяє селективно і стабільно маркувати Nup358 у живих або фіксованих клітинах. У клітинах U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 фузійний білок локалізується в ядерній оболонці у вигляді точкового розподілу, характерного для цитоплазматичних філаментів NPC. Ця конфігурація підтримує високороздільну флуоресцентну візуалізацію, мікроскопію надвисокої роздільної здатності, мічення методом імпульсного переслідування та відстеження окремих молекул для вивчення архітектури та динаміки NPC. Плоска морфологія та великі ядра клітин U2OS додатково полегшують кількісну візуалізацію структур ядерної оболонки.

Ця модель дозволяє досліджувати специфічні функції Nup358 у CRM1/експортин-залежному ядерному експорті, регуляції циклу Ran GTPase та просторовій організації цитоплазматичних транспортних платформ. З огляду на участь Nup358 у формуванні мітотичного веретена та функції кінетохору, клітинна лінія також підходить для вивчення залежної від клітинного циклу перерозподілу нуклеопоринів та розбирання/повторного складання NPC під час мітозу. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 забезпечує фізіологічно релевантну платформу для аналізу структурних і функціональних аспектів цитоплазматичної поверхні ядерного пористого комплексу в клітинах людини.

37°C, 5% _CO2, волога атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

У Cytion ми відповідаємо за якість та життєздатність нашої продукції. Ми гарантуємо, що наші клітини будуть життєздатними на початку культивування протягом 60 днів після відвантаження з нашого заводу. Ми запевняємо, що всі матеріали відповідають специфікаціям, описаним у сертифікаті аналізу та/або паспорті продукту

Для отримання більш детальної інформації, будь ласка, зверніться до нашого <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Заяви про гарантію</a>