U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 je genomsko spremenjena človeška osteosarkomska celična linija, pridobljena iz celic U2OS, v kateri je bil endogeni lokus RANBP2 (znan tudi kot NUP358) spremenjen s CRISPR/Cas9, da kodira oznako SNAPf v okviru naravnega proteina. Nup358/RanBP2 je velik nukleoporin, lokaliziran v citoplazemskih filamentih jedrskega por kompleksa (NPC), ki ima ključno vlogo v nukleocitoplazemskem transportu, SUMOylaciji in mitotičnih procesih. Endogeno označevanje zagotavlja, da se SNAPf-Nup358 izraža pod fiziološkim nadzorom promotorja, ohranja naravne ravni izražanja in zmanjšuje artefakte, povezane s sistemi prekomernega izražanja.

Oznaka SNAPf je hitro označevalna različica oznake SNAP, ki se kovalentno veže na bencilguanin-konjugirane substrata, kar omogoča selektivno in stabilno fluorescenčno označevanje Nup358 v živih ali fiksiranih celicah. V celicah U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 se fuzijski protein lokalizira v jedrni ovojnici v točkovni porazdelitvi, značilni za citoplazemske NPC filamente. Ta konfiguracija podpira visokoločljivo fluorescenčno slikanje, mikroskopijo z visoko ločljivostjo, označevanje s pulzno-zasledovanjem in pristope sledenja posameznih molekul za preučevanje arhitekture in dinamike NPC. Ploščata morfologija in velika jedra celic U2OS dodatno olajšujejo kvantitativno slikanje struktur jedrske ovojnice.

Ta model omogoča preučevanje vlog Nup358 v CRM1/eksportin-odvisnem jedrskem izvozu, regulaciji cikla Ran GTPaze in prostorski organizaciji citoplazemskih transportnih platform. Glede na vpletenost Nup358 v sestavo mitotičnega vretena in funkcijo kinetokora je celična linija primerna tudi za preučevanje od celičnega cikla odvisne prerazporeditve nukleoporinov in razstavljanja/ponovnega sestavljanja NPC med mitozo. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 zagotavlja fiziološko relevantno platformo za razčlenitev strukturnih in funkcionalnih vidikov citoplazemske strani jedrskega por kompleksa v človeških celicah.

37 °C, 5 %_CO2, vlažno ozračje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

V podjetju Cytion stojimo za kakovostjo in uporabnostjo svojih izdelkov. Zagotavljamo, da bodo naše celice ob začetku gojenja še 60 dni po odpremi iz naših obratov vitalne. Zagotavljamo, da so vsi materiali skladni s specifikacijami, opisanimi v potrdilu o analizi in/ali listu izdelka

Za vse podrobnosti si oglejte našo <a href=""/Kdo smo/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garancijsko izjavo