U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 is een genoombewerkte menselijke osteosarcoomcellijn afgeleid van U2OS-cellen waarin de endogene RANBP2-locus (ook bekend als NUP358) is gemodificeerd door CRISPR/Cas9 om een SNAPf-tag in-frame met het natuurlijke eiwit te coderen. Nup358/RanBP2 is een groot nucleoporine dat zich bevindt in de cytoplasmatische filamenten van het nucleaire poriecomplex (NPC) en een cruciale rol speelt in nucleocytoplasmatisch transport, SUMOylatie en mitotische processen. Endogene tagging zorgt ervoor dat SNAPf-Nup358 wordt uitgedrukt onder fysiologische promotorcontrole, waardoor de natuurlijke expressieniveaus behouden blijven en artefacten die verband houden met overexpressiesystemen tot een minimum worden beperkt.

De SNAPf-tag is een snel labelende variant van de SNAP-tag die covalent bindt aan benzylguanine-geconjugeerde substraten, waardoor selectieve en stabiele fluorescerende labeling van Nup358 in levende of gefixeerde cellen mogelijk is. In U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2-cellen lokaliseert het fusie-eiwit zich in de kernmembraan in een puntvormige verdeling die kenmerkend is voor cytoplasmatische NPC-filamenten. Deze configuratie ondersteunt hoge-resolutie fluorescentiebeeldvorming, superresolutiemicroscopie, pulse-chase-labeling en single-molecule tracking-benaderingen om de architectuur en dynamica van NPC te bestuderen. De vlakke morfologie en grote kernen van U2OS-cellen vergemakkelijken bovendien kwantitatieve beeldvorming van kernmembraanstructuren.

Dit model maakt het mogelijk om de specifieke rol van Nup358 te onderzoeken in CRM1/exportine-afhankelijke nucleaire export, Ran GTPase-cyclusregulatie en de ruimtelijke organisatie van cytoplasmatische transportplatforms. Gezien de betrokkenheid van Nup358 bij de assemblage van de mitotische spindel en de kinetochorefunctie, is de cellijn ook geschikt voor het bestuderen van de celcyclusafhankelijke herverdeling van nucleoporines en NPC-demontage/herassemblage tijdens mitose. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 biedt een fysiologisch relevant platform voor het ontleden van structurele en functionele aspecten van het cytoplasmatische oppervlak van het nucleaire poriecomplex in menselijke cellen.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring