Ga naar de inhoud
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo
Weefsel
Bot
Ziekte
Osteosarcoom

Documenten

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo

Cell line · Productnummer 300448

De U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo is een genetisch gemodificeerde cellijn die is afgeleid van de U-2 OS-cellen van het menselijk osteosarcoom. Deze cellijn is gemodificeerd met behulp van...

€800.00excl. btw en verzendkosten
Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo is een genetisch gemanipuleerde cellijn afgeleid van de menselijke osteosarcoom U-2 OS-cellen. Deze cellijn is gemodificeerd met CRISPR-Cas9-technologie om een HaloTag in te bouwen in de locus van het NUP96-gen. NUP96, onderdeel van het nucleaire poriëncomplex, speelt een cruciale rol in nucleair transport en cellulaire regulatie. De introductie van de HaloTag maakt nauwkeurige visualisatie en biochemische karakterisering mogelijk van de dynamica en interacties van NUP96 in de cel.

Door de covalente aanhechting van fluorescerende liganden of andere probes te vergemakkelijken, maakt de HaloTag real-time beeldvorming mogelijk en biedt het een krachtig hulpmiddel voor het bestuderen van de nucleaire transportmechanismen in levende cellen. Deze specifieke kloon, nummer 252, is geselecteerd vanwege de stabiele expressie van het HaloTagged NUP96, waardoor het consistent presteert in experimentele opstellingen. Deze eigenschap maakt het zeer geschikt voor hoge-resolutie beeldvormingstechnieken en moleculaire interactiestudies, waardoor geavanceerd onderzoek in de celbiologie wordt ondersteund, met name in de context van nucleaire functie en genetische regulatie.

Weefsel
Bot
Ziekte
Osteosarcoom

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-Halo, clone 252) contains a CRISPR-edited NUP96-Halo fusion generated via lentiviral delivery, enabling fluorescent labeling of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtig

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo (Cytion catalogusnummer 300448)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FI
Inlegger
Het Ellenberg Lab (EMBL)

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
NUP96-Halo (endogeen eiwit van het nucleaire poriëncomplex 96, gemerkt met Halo)

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucose, w: stabiel Glutamine, w: 2,0 mM Natriumpyruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
15 jaar
Etnische afkomst
Kaukasisch