U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP is een genoombewerkte menselijke osteosarcoomcellijn afgeleid van U2OS-cellen waarin het endogene TPR-gen (Translocated Promoter Region) is gemodificeerd met behulp van CRISPR/Cas9-technologie om een in-frame SNAP-tag te coderen. TPR is een groot coiled-coil nucleoporine dat zich lokaliseert in de nucleaire mand aan de nucleoplasmatische zijde van het nucleaire poriecomplex (NPC). Door TPR op zijn endogene locus te taggen, wordt het fusie-eiwit onder natuurlijke regulerende controle tot expressie gebracht, waardoor de fysiologische expressieniveaus behouden blijven en de juiste opname in de nucleaire mandstructuur behouden blijft.

De SNAP-tag maakt covalente labeling van TPR mogelijk met benzylguanine-geconjugeerde fluorescerende substraten in levende of gefixeerde cellen, wat een zeer specifieke en stabiele visualisatie mogelijk maakt. In U2OS-CRISPR-TPR-SNAP-cellen vertoont gelabeld TPR een karakteristieke puntvormige ringachtige verdeling aan de kernmembraan, die overeenkomt met NPC-geassocieerde nucleaire mandstructuren. Dit systeem is zeer geschikt voor kwantitatieve fluorescentiemicroscopie, superresolutiebeeldvorming, pulse-chase-labeling en dynamische studies van de assemblage en omzetting van de nucleaire mand. De vlakke morfologie en grote kernen van U2OS-cellen vergemakkelijken beeldvorming met hoge resolutie van structuren die geassocieerd zijn met de kernmembraan.

TPR speelt een cruciale rol bij mRNA-export, regulering van nucleair transport, chromatine-organisatie aan de kernperiferie en ruimtelijke genoomorganisatie. TPR is ook betrokken bij de vorming van nucleair transportgerelateerde subcompartimenten en bij de uitsluiting van heterochromatine uit nucleaire poriëngerelateerde regio's. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP biedt een fysiologisch relevant model voor het ontleden van de architectuur en dynamica van de nucleaire mand, het onderzoeken van nucleocytoplasmatische transportmechanismen en het bestuderen van nucleaire envelop-geassocieerde chromatine-interacties onder endogene expressieomstandigheden.

37°C, 5%_CO2, bevochtigde atmosfeer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad

Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring