Ga naar de inhoud
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP
Weefsel
Bot
Ziekte
Osteosarcoom

Documenten

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

Cell line · Productnummer 300444

De U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP is een genetisch gemodificeerde osteosarcoomcellijn die is afgeleid van de oorspronkelijke menselijke U-2 OS-cellijn. Deze cellijn is genetisch gemodificeerd...

€800.00excl. btw en verzendkosten
Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP is een genetisch gemodificeerde osteosarcoom cellijn afgeleid van de ouder U-2 OS menselijke cellijn. Deze cellijn is gemodificeerd door CRISPR/Cas9-gemedieerde genoombewerking om een SNAP-tag op te nemen in het NUP96-gen, waardoor de dynamica van het nucleaire poriecomplex kan worden gevisualiseerd en bestudeerd. Nucleaire poriecomplexen (NPC's) zijn cruciaal voor de regulatie van nucleocytoplasmatisch transport, en NUP96 is een belangrijk onderdeel van het NPC en speelt een centrale rol in de structurele integriteit en functie ervan.

In U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP kloon nr. 33 zorgt de integratie van de SNAP-tag in de NUP96 locus voor een specifieke en covalente hechting van fluorescerende substraten of andere chemische probes die gebruikt kunnen worden voor live-cell imaging en andere biochemische analyses. Deze eigenschap maakt het een hulpmiddel van onschatbare waarde voor het onderzoeken van de moleculaire dynamica van nucleocytoplasmatisch transport, het begrijpen van NPC-gerelateerde pathologieën en het screenen op therapeutische verbindingen die de NPC-functie beïnvloeden. De cellijn behoudt ook de eigenschappen van de ouderlijke U-2 OS lijn, waaronder een hoge mate van genetische stabiliteit en kweekgemak, waardoor het geschikt is voor high-throughput screening en uitgebreide studies in de celbiologie.

Door de specificiteit van de modificatie op het NUP96-gen biedt U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP kloon nr. 33 een uniek model voor de gedetailleerde studie van NPC-componenten in de context van cellulaire functie en disfunctie. Onderzoekers kunnen het SNAP-tag systeem gebruiken om NUP96 selectief en snel te labelen, waardoor real-time visualisatie van NPC dynamica onder fysiologische en pathologische omstandigheden mogelijk wordt. Deze specifieke kloon kan dienen als een robuust platform voor zowel fundamenteel onderzoek als toegepaste biomedische studies en levert een belangrijke bijdrage aan de celbiologie, genetica en oncologie.

Weefsel
Bot
Ziekte
Osteosarcoom

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP, clone 33) contains a CRISPR-engineered NUP96-SNAP fusion facilitating SNAP-tag chemical labeling of nuclear pores. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Identificatiegegevens

Bronvermelding
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP (Cytion catalogusnummer 300444)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FL
Inlegger
Het Ellenberg Lab (EMBL)

04Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
NUP96-SNAP (eiwit 96 van het nucleaire poriëncomplex, SNAP-tag)

05Behandeling en kweek

Kweekmedium
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucose, w: stabiel Glutamine, w: 2,0 mM Natriumpyruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikelnummer 820200a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS, 3,0 g/L Glucose, stabiele Glutamine, 2,0 mM Natriumpyruvaat, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAA
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

07Donateur

Leeftijd van de donor
15 jaar
Etnische afkomst
Kaukasisch