İçeriğe atla
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP
Doku
Kemik
Hastalık
Osteosarkom

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP

Cell line · Ürün numarası 300444

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP, ana U-2 OS insan hücre hattından türetilmiş, genetik olarak modifiye edilmiş bir osteosarkom hücre hattıdır. Bu hücre hattı, mühendislikle...

€800.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
  • CoA
1

01Genel bilgiler

Açıklama

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP, ana U-2 OS insan hücre hattından türetilen genetik olarak modifiye edilmiş bir osteosarkom hücre hattıdır. Bu hücre hattı, CRISPR/Cas9 aracılı genom düzenleme yoluyla, NUP96 genine bir SNAP etiketi ekleyerek nükleer gözenek kompleksi dinamiklerinin görselleştirilmesini ve incelenmesini sağlayacak şekilde tasarlanmıştır. Nükleer gözenek kompleksleri (NPC'ler), nükleositoplazmik taşınmanın düzenlenmesi için çok önemlidir ve NUP96, NPC'nin önemli bir bileşenidir ve yapısal bütünlüğü ve işlevinde çok önemli bir rol oynar.

U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP klon no.33'te, SNAP etiketinin NUP96 lokusuna entegrasyonu, canlı hücre görüntüleme ve diğer biyokimyasal analizler için kullanılabilen floresan substratların veya diğer kimyasal probların spesifik ve kovalent bağlanmasına izin verir. Bu özellik onu nükleositoplazmik taşınmanın moleküler dinamiklerini araştırmak, NPC ile ilgili patolojileri anlamak ve NPC işlevini etkileyen terapötik bileşikleri taramak için paha biçilmez bir araç haline getirmektedir. Hücre hattı ayrıca, yüksek düzeyde genetik stabilite ve kültür kolaylığı içeren ebeveyn U-2 OS hattının özelliklerini koruyarak, hücre biyolojisinde yüksek verimli tarama ve genişletilmiş çalışmalar için uygun hale getirir.

NUP96 genindeki modifikasyonun özgüllüğü nedeniyle, U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP klon no.33, hücresel işlev ve işlev bozukluğu bağlamında NPC bileşenlerinin ayrıntılı çalışması için benzersiz bir model sağlar. Araştırmacılar, NUP96'yı seçici ve hızlı bir şekilde etiketlemek için SNAP-tag sisteminden faydalanarak fizyolojik ve patolojik koşullar altında NPC dinamiklerinin gerçek zamanlı görselleştirilmesini kolaylaştırabilir. Bu özel klon, hem temel araştırmalar hem de uygulamalı biyomedikal çalışmalar için sağlam bir platform görevi görebilir ve hücresel biyoloji, genetik ve onkoloji alanlarına önemli katkılar sağlayabilir.

Doku
Kemik
Hastalık
Osteosarkom

02Sınıflandırma

Canlı
İnsan
Cinsiyet
Kadın
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GMO-S1
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP, clone 33) contains a CRISPR-engineered NUP96-SNAP fusion facilitating SNAP-tag chemical labeling of nuclear pores. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP (Cytion katalog numarası 300444)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FL
Mevduat sahibi
Ellenberg Laboratuvarı (EMBL)

04İfade ve duyarlılık

Protein ekspresyonu
NUP96-SNAP (nükleer gözenek kompleksi proteini 96, SNAP-tag)

05İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
McCoys 5a, w: 3.0 g/L Glukoz, w: stabil Glutamin, w: 2.0 mM Sodyum piruvat, w: 2.2 g/L NaHCO3 (Cytion makale numarası 820200a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS, 3,0 g/L Glukoz, stabil Glutamin, 2,0 mM Sodyum piruvat, 2,2 g/L NaHCO3, %1 NEAA ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Ekim yoğunluğu
1 x 104 hücre/cm2
Sıvı değişimi
haftada 2 ila 3 kez
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

07Bağışçı

Bağışçının yaşı
15 yıl
Etnik köken
Kafkas