U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, endojen SEH1L (SEH1) geninin CRISPR/Cas9 teknolojisi kullanılarak bir çerçeve içi SNAPf etiketini kodlamak üzere modifiye edildiği U2OS hücrelerinden türetilmiş, genomu düzenlenmiş bir insan osteosarkom hücre hattıdır. SEH1, gözenek iskeletinin montajına ve stabilitesine katkıda bulunan nükleer gözenek kompleksinin (NPC) temel yapısal modülü olan Y-kompleksinin (NUP107-160 kompleksi olarak da bilinir) bir bileşenidir. SNAPf kodlama dizisini endojen lokusa ekleyerek, etiketli SEH1 proteini doğal düzenleyici kontrol altında eksprese edilir, fizyolojik ekspresyon seviyeleri korunur ve nükleer gözenek bileşimindeki bozulmalar en aza indirilir.

SNAPf etiketi, benzylguanyin konjuge substratlara kovalent olarak bağlanan, canlı veya sabit hücrelerde seçici ve stabil floresan etiketleme sağlayan, mühendislik ürünü, hızlı reaksiyon gösteren bir SNAP etiketi varyantıdır. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 hücrelerinde, füzyon proteini NPC dağılımının karakteristik noktalı deseninde nükleer zarfta lokalize olur. Etiketleme endojen protein seviyelerinde gerçekleştiğinden, bu sistem NPC organizasyonunu ve stokiyometrisini incelemek amacıyla yapılan kantitatif floresan mikroskopi, süper çözünürlüklü görüntüleme ve tek parçacık izleme analizleri için çok uygundur. U2OS hücrelerinin düz morfolojisi ve büyük çekirdekleri, nükleer zarf yapılarının yüksek çözünürlüklü görselleştirilmesini daha da kolaylaştırır.

SEH1, NPC biyogenezine katılır ve mitoz sırasında kinetokor ile ilişkili süreçlerde de rol oynar. Buna göre, bu hücre hattı, hücre döngüsüne bağlı NPC montajı ve demontajı, gözenek iskeleti içindeki Y kompleksinin uzamsal organizasyonu ve SEH1'in nükleer zarf ve mitotik kinetokorlarda potansiyel ikili rollerini araştırmak için sağlam bir platform sağlar. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, fizyolojik olarak ilgili ekspresyon koşulları altında nükleer gözenek mimarisi ve dinamiklerinin mekanistik çalışmalarını mümkün kılar.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın