U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 adalah garis sel osteosarcoma manusia yang dimodifikasi genomnya, yang berasal dari sel U2OS, di mana gen SEH1L (SEH1) endogen telah dimodifikasi menggunakan teknologi CRISPR/Cas9 untuk mengkodekan tag SNAPf yang berada dalam bingkai pembacaan. SEH1 merupakan komponen dari kompleks Y (juga dikenal sebagai kompleks NUP107-160), modul struktural inti dari kompleks pori nuklir (NPC) yang berkontribusi pada perakitan dan stabilitas rangkaian pori. Dengan menyisipkan urutan pengkodean SNAPf pada lokus endogen, protein SEH1 yang ditandai diekspresikan di bawah kendali regulasi alami, mempertahankan tingkat ekspresi fisiologis dan meminimalkan gangguan pada komposisi pori nuklir.

Tag SNAPf adalah varian yang dimodifikasi secara rekayasa dari tag SNAP, yang secara kovalen mengikat substrat yang dikonjugasi dengan benzylguanine, memungkinkan penandaan fluoresen selektif dan stabil pada sel hidup atau yang telah difiksasi. Pada sel U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1, protein fusi ini berlokasi pada selubung nukleus dengan pola bercak yang khas untuk distribusi NPC. Karena penandaan terjadi pada tingkat protein endogen, sistem ini sangat cocok untuk mikroskopi fluoresensi kuantitatif, pencitraan super-resolusi, dan analisis pelacakan partikel tunggal yang bertujuan untuk mengurai organisasi dan stoikiometri NPC. Morfologi datar dan nukleus besar sel U2OS juga memudahkan visualisasi resolusi tinggi struktur selubung nukleus.

SEH1 terlibat dalam biogenesis NPC dan juga dikaitkan dengan proses kinetokor selama mitosis. Oleh karena itu, garis sel ini menyediakan platform yang andal untuk menyelidiki perakitan dan pembongkaran NPC yang bergantung pada siklus sel, organisasi spasial kompleks Y di dalam rangkaian pori, serta peran ganda potensial SEH1 di selubung nukleus dan kinetokor mitosis. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 memfasilitasi studi mekanistik tentang arsitektur dan dinamika pori nukleus dalam kondisi ekspresi yang relevan secara fisiologis.

37°C, 5%_CO2, atmosfer yang dilembabkan.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

Di Cytion, kami mendukung kualitas dan kelangsungan hidup produk kami. Kami menjamin bahwa sel kami akan dapat bertahan hidup pada awal kultur selama 60 hari setelah pengiriman dari fasilitas kami. Kami menjamin bahwa semua bahan sesuai dengan spesifikasi yang dijelaskan dalam Sertifikat Analisis dan / atau Lembar Produk

Untuk detail lengkap, silakan merujuk ke <a href=""/Siapa-kami-Garansi/Garansi/"" hreflang=""x-default"">Pernyataan Jaminan kami