U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 هو خط خلايا سرطانية عظمية بشرية معدلة جينومياً مشتقة من خلايا U2OS تم تعديل الجين SEH1L (SEH1) الداخلي فيها باستخدام تقنية CRISPR/Cas9 لترميز علامة SNAPf داخل الإطار. SEH1 هو أحد مكونات المركب Y (المعروف أيضًا باسم مركب NUP107-160)، وهو وحدة هيكلية أساسية لمركب المسام النووية (NPC) تساهم في تجميع واستقرار هيكل المسام. من خلال إدخال تسلسل ترميز SNAPf في الموقع الداخلي، يتم التعبير عن البروتين SEH1 الموسوم تحت التحكم التنظيمي الأصلي، مما يحافظ على مستويات التعبير الفسيولوجي ويقلل من الاضطرابات في تكوين المسام النووية.

علامة SNAPf هي متغير هندسي سريع التفاعل من علامة SNAP يرتبط تساهميًا بركائز مترافقة مع بنزيلجوانين، مما يسمح بوضع علامات فلورية انتقائية ومستقرة في الخلايا الحية أو الثابتة. في خلايا U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1، يتركز البروتين المدمج في الغلاف النووي في نمط نقطي مميز لتوزيع NPC. نظرًا لأن التوسيم يحدث على مستويات البروتينات الداخلية، فإن هذا النظام مناسب تمامًا للمجهر الفلوري الكمي والتصوير فائق الدقة وتحليلات تتبع الجسيمات الفردية التي تهدف إلى تحليل تنظيم NPC والتوازن الكيميائي. تساعد الشكل المسطح والنوى الكبيرة لخلايا U2OS على تسهيل الرؤية عالية الدقة لهياكل الغلاف النووي.

يشارك SEH1 في تكوين NPC، كما أنه متورط في العمليات المرتبطة بالكينتوكور أثناء الانقسام. وبناءً على ذلك، يوفر هذا الخط الخلوي منصة قوية لدراسة تجميع وتفكيك NPC المعتمد على دورة الخلية، والتنظيم المكاني لمركب Y داخل هيكل المسام، والأدوار المزدوجة المحتملة لـ SEH1 في الغلاف النووي والكينتوكور الانقسامي. يتيح U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 إجراء دراسات آلية لهيكل المسام النووية وديناميكياتها في ظل ظروف التعبير ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية.

37 درجة مئوية، و5% من _ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

في Cytion، نلتزم في Cytion بجودة منتجاتنا وحيويتها. نحن نضمن أن تكون خلايانا قابلة للحياة في بداية الاستزراع لمدة 60 يومًا بعد الشحن من منشآتنا. نؤكد أن جميع المواد مطابقة للمواصفات الموضحة في شهادة التحليل و/أو ورقة المنتج

للحصول على التفاصيل الكاملة، يُرجى الرجوع إلى <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">بيان الضمان