U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 on genomin muokattu ihmisen osteosarkoomasolulinja, joka on johdettu U2OS-soluista, joissa endogeeninen SEH1L (SEH1) -geeni on muokattu CRISPR/Cas9-tekniikalla koodaamaan in-frame SNAPf-tunniste. SEH1 on osa Y-kompleksia (tunnetaan myös nimellä NUP107-160-kompleksi), joka on ydinporokompleksin (NPC) ydinrakenteellinen moduuli, joka edistää porojen tukirakenteen kokoamista ja vakautta. Lisäämällä SNAPf-koodaussekvenssin endogeeniseen lokukseen, merkitty SEH1-proteiini ilmentyy natiivin säätelyn alaisena, säilyttäen fysiologiset ilmentymistasot ja minimoiden häiriöt ydinporojen koostumuksessa.

SNAPf-tag on muokattu, nopeasti reagoiva SNAP-tagin variantti, joka sitoutuu kovalenttisesti bentsyyliguaninikonjugoitujen substraattien kanssa, mikä mahdollistaa selektiivisen ja stabiilin fluoresoivan leimauksen elävissä tai kiinnitetyissä soluissa. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-soluissa fuusioproteiini lokalisoituu ydinvaipaan NPC:n jakautumiselle tyypillisellä pistekuvioisella tavalla. Koska merkintä tapahtuu endogeenisten proteiinitasojen tasolla, tämä järjestelmä sopii hyvin kvantitatiiviseen fluoresenssimikroskopiaan, superresoluutioiseen kuvantamiseen ja yksittäisten hiukkasten seurantaan, joiden tarkoituksena on analysoida NPC:n organisaatio ja stoikiometria. U2OS-solujen tasainen morfologia ja suuret tumat helpottavat entisestään ydinkalvon rakenteiden korkean resoluution visualisointia.

SEH1 osallistuu NPC:n biogeneesiin ja on myös ollut mukana mitoosissa tapahtuvissa kinetokoorin prosesseissa. Näin ollen tämä solulinja tarjoaa vankan alustan solusyklistä riippuvan NPC:n kokoamisen ja purkamisen, Y-kompleksin spatiaalisen organisaation huokosrakenteessa sekä SEH1:n mahdollisten kaksoisroolien tutkimiseen ydinkotelossa ja mitoosikinetokoorissa. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 mahdollistaa ydinporojen arkkitehtuurin ja dynamiikan mekanistisen tutkimuksen fysiologisesti merkityksellisissä ilmentymisolosuhteissa.

37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

Me Cytionilla seisomme tuotteidemme laadun ja elinkelpoisuuden takana. Takaamme, että solumme ovat elinkelpoisia viljelyn alkaessa 60 päivän ajan sen jälkeen, kun ne on lähetetty laitoksestamme. Vakuutamme, että kaikki materiaalit ovat analyysitodistuksessa ja/tai tuoteselosteessa kuvattujen eritelmien mukaisia

Lisätietoja on <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Takuulausumassa