Siirry sisältöön
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo
Kudos
Luu
Sairaus
Osteosarkooma

Asiakirjat

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo

Cell line · Tuotenumero 300448

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo on geneettisesti muunnettu solulinja, joka on johdettu ihmisen osteosarkooman U-2 OS -soluista. Tätä solulinjaa on muunnettu käyttämällä...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo on geneettisesti muunnettu solulinja, joka on johdettu ihmisen osteosarkoomasta U-2 OS -soluista. Tämä solulinja on muunnettu CRISPR-Cas9-teknologian avulla siten, että siihen on lisätty HaloTag NUP96-geenin lokukseen. NUP96 on osa ydinhuokoskompleksia, ja sillä on kriittinen rooli ydinkuljetuksessa ja solujen säätelyssä. HaloTagin lisääminen mahdollistaa NUP96:n dynamiikan ja vuorovaikutusten tarkan visualisoinnin ja biokemiallisen karakterisoinnin solun sisällä.

Helpottamalla fluoresoivien ligandien tai muiden koettimien kovalenttista kiinnittämistä HaloTag mahdollistaa reaaliaikaisen kuvantamisen ja tarjoaa tehokkaan välineen ydinkuljetusmekanismien tutkimiseen elävissä soluissa. Tämä klooni, numero 252, on valittu sen vuoksi, että se ilmentää vakaasti HaloTag-merkittyä NUP96:ta, mikä takaa tasaisen suorituskyvyn koejärjestelyissä. Tämän ominaisuuden ansiosta se soveltuu erinomaisesti korkearesoluutioisiin kuvantamistekniikoihin ja molekulaarisiin vuorovaikutustutkimuksiin, mikä tukee solubiologian kehittynyttä tutkimusta erityisesti ydintoiminnan ja geneettisen säätelyn yhteydessä.

Kudos
Luu
Sairaus
Osteosarkooma

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-Halo, clone 252) contains a CRISPR-edited NUP96-Halo fusion generated via lentiviral delivery, enabling fluorescent labeling of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen

04Tunnisteet

Lähdeviite
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo (Cytionin luettelonumero 300448)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FI
Tallettaja
Ellenbergin laboratorio (EMBL)

05Ilmentyminen ja alttius

Proteiinin ilmentyminen
NUP96-Halo (endogeeninen ydinhuokoskompleksin proteiini 96, Halo-merkitty)

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
McCoys 5a, w: 3,0 g/l glukoosia, w: vakaa glutamiini, w: 2,0 mM natriumpyruvaattia, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820200a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Kylvötiheys
1 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
15 vuotta
Etnisyys
Kaukasialainen