Skip to content
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo
Tissue
กระดูก
Disease
มะเร็งกระดูกชนิดออสทีโอซาร์โคมา

Documents

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo

Cell line · Product number 300448

The U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo is a genetically engineered cell line derived from the human osteosarcoma U-2 OS cells. This cell line has been modified usin...

€800.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo เป็นสายพันธุ์เซลล์ที่ถูกดัดแปลงพันธุกรรมซึ่งได้มาจากเซลล์มะเร็งกระดูกชนิด osteosarcoma ของมนุษย์ U-2 OS สายพันธุ์นี้ได้รับการดัดแปลงโดยใช้เทคโนโลยี CRISPR-Cas9 เพื่อเพิ่ม HaloTag ที่ตำแหน่งยีน NUP96NUP96 ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของคอมเพล็กซ์รูพรุนนิวเคลียร์ มีบทบาทสำคัญในการขนส่งภายในนิวเคลียสและการควบคุมเซลล์ การนำ HaloTag มาใช้ช่วยให้สามารถมองเห็นและวิเคราะห์ลักษณะทางชีวเคมีของพลวัตและการปฏิสัมพันธ์ของ NUP96 ภายในเซลล์ได้อย่างแม่นยำ

โดยการอำนวยความสะดวกในการเชื่อมต่อแบบโควาเลนต์ของลิแกนด์เรืองแสงหรือตัวตรวจจับอื่น ๆ HaloTag ช่วยให้สามารถถ่ายภาพแบบเรียลไทม์และเป็นเครื่องมือที่ทรงพลังสำหรับการศึกษาการขนส่งในนิวเคลียสของเซลล์ที่มีชีวิต โคลนเฉพาะนี้ หมายเลข 252 ได้รับการคัดเลือกเนื่องจากมีการแสดงออกที่เสถียรของ HaloTagged NUP96 ซึ่งรับประกันประสิทธิภาพที่สม่ำเสมอในการตั้งค่าการทดลองคุณสมบัตินี้ทำให้เหมาะอย่างยิ่งสำหรับเทคนิคการถ่ายภาพความละเอียดสูงและการศึกษาปฏิสัมพันธ์ระดับโมเลกุล ซึ่งช่วยสนับสนุนการวิจัยขั้นสูงในชีววิทยาเซลล์ โดยเฉพาะในบริบทของการทำงานของนิวเคลียสและการควบคุมทางพันธุกรรม

Tissue
กระดูก
Disease
มะเร็งกระดูกชนิดออสทีโอซาร์โคมา

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-Halo, clone 252) contains a CRISPR-edited NUP96-Halo fusion generated via lentiviral delivery, enabling fluorescent labeling of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
ลักษณะคล้ายเยื่อบุผิว

04Identifiers

Citation
U-2 OS-CRISPR-NUP96-ฮาโล (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 300448)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FI
Depositor
ห้องปฏิบัติการเอลเลนเบิร์ก (EMBL)

05Expression and susceptibility

Protein expression
NUP96-Halo (โปรตีนคอมเพล็กซ์รูพรุนนิวเคลียร์ชนิดภายในเซลล์ 96, Halo แท็ก)

06Handling and culture

Culture medium
McCoys 5a, w: 3.0 กรัม/ลิตร กลูโคส, w: เสถียร กลูตามีน, w: 2.0 มิลลิโมลาร์ โซเดียมไพรูเวต, w: 2.2 กรัม/ลิตร NaHCO3 (หมายเลขบทความ Cytion 820200a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
นำอาหารเลี้ยงเซลล์เก่าออกจากเซลล์ที่เกาะติดและล้างด้วย PBS ที่ไม่มีแคลเซียมและแมกนีเซียม สำหรับขวด T25 ให้ใช้ PBS 3-5 มล. และสำหรับขวด T75 ให้ใช้ 5-10 มล. จากนั้นปิดเซลล์ให้มิดด้วย Accutase โดยใช้ 1-2 มล. สำหรับขวด T25 และ 2.5 มล. สำหรับขวด T75ปล่อยให้เซลล์บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 8-10 นาทีเพื่อให้เซลล์หลุดออกจากกัน หลังจากบ่มแล้ว ให้ผสมเซลล์เบา ๆ กับอาหารเลี้ยงเซลล์ 10 มิลลิลิตรเพื่อทำให้เซลล์แขวนลอยอีกครั้ง จากนั้นปั่นเหวี่ยงที่ 300 เท่าของแรงโน้มถ่วงโลก (300xg) เป็นเวลา 3 นาที เทส่วนใสที่ได้ทิ้งไป แล้วแขวนลอยเซลล์ในอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ จากนั้นถ่ายเซลล์ไปยังขวดเพาะเลี้ยงใหม่ที่เติมอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่ไว้แล้ว
Seeding density
1 x 10^4 เซลล์/ซม.^2
Fluid renewal
2 ถึง 3 ครั้งต่อสัปดาห์
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

08Donor

Donor age
15 ปี
Ethnicity
คอเคเชียน

You may also need