Μετάβαση στο περιεχόμενο
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo
Ιστός
Οστά
Ασθένεια
Οστεοσάρκωμα

Έγγραφα

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo

Cell line · Αριθμός προϊόντος 300448

Η U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo είναι μια γενετικά τροποποιημένη κυτταρική σειρά που προέρχεται από τα κύτταρα U-2 OS του ανθρώπινου οστεοσαρκώματος. Αυτή η κυτταρική σειρά έχει τροποποιηθεί με τη χρήση...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής
Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
  • CoA
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Το U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo είναι μια γενετικά τροποποιημένη κυτταρική σειρά που προέρχεται από τα κύτταρα U-2 OS του ανθρώπινου οστεοσαρκώματος. Αυτή η κυτταρική σειρά έχει τροποποιηθεί με τη χρήση της τεχνολογίας CRISPR-Cas9 για την ενσωμάτωση μιας ετικέτας HaloTag στον τόπο του γονιδίου NUP96. Το NUP96, μέρος του συμπλόκου των πυρηνικών πόρων, διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στην πυρηνική μεταφορά και την κυτταρική ρύθμιση. Η εισαγωγή του HaloTag επιτρέπει την ακριβή απεικόνιση και τον βιοχημικό χαρακτηρισμό της δυναμικής και των αλληλεπιδράσεων του NUP96 εντός του κυττάρου.

Διευκολύνοντας την ομοιοπολική προσκόλληση φθορίζοντων συνδέσμων ή άλλων ανιχνευτών, το HaloTag επιτρέπει την απεικόνιση σε πραγματικό χρόνο και παρέχει ένα ισχυρό εργαλείο για τη μελέτη των μηχανισμών πυρηνικής μεταφοράς σε ζωντανά κύτταρα. Ο συγκεκριμένος κλώνος, με αριθμό 252, έχει επιλεγεί για τη σταθερή έκφραση του HaloTagged NUP96, εξασφαλίζοντας σταθερή απόδοση σε πειραματικές διατάξεις. Το χαρακτηριστικό αυτό τον καθιστά ιδιαίτερα κατάλληλο για τεχνικές απεικόνισης υψηλής ανάλυσης και μελέτες μοριακής αλληλεπίδρασης, υποστηρίζοντας έτσι την προηγμένη έρευνα στην κυτταρική βιολογία, ιδίως στο πλαίσιο της πυρηνικής λειτουργίας και της γενετικής ρύθμισης.

Ιστός
Οστά
Ασθένεια
Οστεοσάρκωμα

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Άνθρωπος
Σεξ
Γυναίκα
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
GMO-S1
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-Halo, clone 252) contains a CRISPR-edited NUP96-Halo fusion generated via lentiviral delivery, enabling fluorescent labeling of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Επιθηλιοειδής

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo (αριθμός καταλόγου Cytion 300448)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
9606
Κελλοσαύρος
CVCL_B7FI
Καταθέτης
Εργαστήριο Ellenberg (EMBL)

05Έκφραση και ευαισθησία

Έκφραση πρωτεϊνών
NUP96-Halo (ενδογενής πρωτεΐνη 96 του συμπλέγματος πυρηνικών πόρων, με ετικέτα Halo)

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
McCoys 5a, w: 3,0 g/L γλυκόζη, w: σταθερή γλουταμίνη, w: 2,0 mM πυρουβικό νάτριο, w: 2,2 g/L NaHCO3 (αριθμός άρθρου Cytion 820200a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Πυκνότητα σποράς
1 x 104 κύτταρα/cm2
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Ηλικία δωρητή
15 χρόνια
Εθνικότητα
Καυκάσιος