Gå til innholdet
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo
Vev
Bein
Sykdom
Osteosarkom

Dokumenter

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo

Cell line · Produktnummer 300448

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo er en genmodifisert cellelinje avledet fra U-2 OS-celler fra humant osteosarkom. Denne cellelinjen er blitt modifisert ved hjelp av...

€800.00ekskl. mva. og frakt
På lager
Lot
Anbefalt (det ferskeste partiet)
  • CoA
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo er en genmodifisert cellelinje som er avledet fra de humane osteosarkomcellene U-2 OS. Denne cellelinjen er modifisert ved hjelp av CRISPR-Cas9-teknologi for å inkorporere en HaloTag ved NUP96-genet. NUP96, som er en del av kjerneporkomplekset, spiller en viktig rolle i kjernetransport og celleregulering. Introduksjonen av HaloTag gjør det mulig å visualisere og biokjemisk karakterisere NUP96s dynamikk og interaksjoner i cellen.

Ved å legge til rette for kovalent feste av fluorescerende ligander eller andre prober, muliggjør HaloTag avbildning i sanntid og gir et kraftig verktøy for å studere nukleære transportmekanismer i levende celler. Denne klonen, nummer 252, er valgt ut på grunn av sitt stabile uttrykk av HaloTagged NUP96, noe som sikrer konsekvent ytelse i eksperimentelle oppsett. Denne egenskapen gjør den svært godt egnet for høyoppløselige avbildningsteknikker og molekylære interaksjonsstudier, og støtter dermed avansert forskning innen cellebiologi, spesielt i forbindelse med kjernefunksjon og genetisk regulering.

Vev
Bein
Sykdom
Osteosarkom

02Klassifisering

Organisme
Menneske
Sex
Kvinne
Vekstegenskaper
Tilhenger
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-Halo, clone 252) contains a CRISPR-edited NUP96-Halo fusion generated via lentiviral delivery, enabling fluorescent labeling of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitel-lignende

04Identifikatorer

Kildehenvisning
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo (Cytion-katalognummer 300448)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FI
Innskjærer
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttrykk og mottakelighet

Proteinekspresjon
NUP96-Halo (endogent kjernepore-kompleks protein 96, Halo-merket)

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
McCoys 5a, m: 3,0 g/L glukose, m: stabil glutamin, m: 2,0 mM natriumpyruvat, m: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikkelnummer 820200a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Såtetthet
1 x 104 celler/cm2
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Donorens alder
15 år
Etnisitet
Kaukasisk