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U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo
Tessuto
Osso
Malattia
Osteosarcoma

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U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo

Cell line · Codice prodotto 300448

La linea cellulare U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo è una linea cellulare geneticamente modificata derivata dalle cellule U-2 OS dell'osteosarcoma umano. Questa linea cellulare è stata modificata utilizzando...

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01Informazioni generali

Descrizione

U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo è una linea cellulare geneticamente modificata derivata dalle cellule dell'osteosarcoma umano U-2 OS. Questa linea cellulare è stata modificata con la tecnologia CRISPR-Cas9 per incorporare un HaloTag nel locus del gene NUP96. NUP96, parte del complesso del poro nucleare, svolge un ruolo critico nel trasporto nucleare e nella regolazione cellulare. L'introduzione dell'HaloTag consente la visualizzazione precisa e la caratterizzazione biochimica delle dinamiche e delle interazioni di NUP96 all'interno della cellula.

Facilitando l'aggancio covalente di ligandi fluorescenti o altre sonde, l'HaloTag consente l'imaging in tempo reale e fornisce un potente strumento per studiare i meccanismi di trasporto nucleare nelle cellule viventi. Questo particolare clone, il numero 252, è stato selezionato per la sua espressione stabile di HaloTagged NUP96, che garantisce prestazioni costanti nelle configurazioni sperimentali. Questa caratteristica lo rende molto adatto alle tecniche di imaging ad alta risoluzione e agli studi di interazione molecolare, supportando così la ricerca avanzata nella biologia cellulare, in particolare nel contesto della funzione nucleare e della regolazione genetica.

Tessuto
Osso
Malattia
Osteosarcoma

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-NUP96-Halo, clone 252) contains a CRISPR-edited NUP96-Halo fusion generated via lentiviral delivery, enabling fluorescent labeling of nuclear pore complexes. The modification is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio

04Identificatori

Riferimento bibliografico
U-2 OS-CRISPR-NUP96-Halo (numero di catalogo Cytion 300448)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FI
Depositario
Il laboratorio Ellenberg (EMBL)

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
NUP96-Halo (proteina 96 del complesso del poro nucleare endogeno, marcata Halo)

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucosio, w: Glutammina stabile, w: 2,0 mM Sodio piruvato, w: 2,2 g/L NaHCO3 (articolo Cytion numero 820200a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
15 anni
Etnia
Caucasico