U2OS-CRISPR-TPR-SNAP
Cell line · Produktnummer 300667
U2OS-CRISPR-TPR-SNAP is a genome-edited human osteosarcoma cell line derived from U2OS cells in which the endogenous TPR (Translocated Promoter Region) ge...
Tilpasning / Anbefalinger
- U2OS-CRISPR-TPR-SNAPCell line€800.00
Anbefalt (det ferskeste partiet)
01Generell informasjon
- Beskrivelse
U2OS-CRISPR-TPR-SNAP er en genomredigert human osteosarkomcellelinje avledet fra U2OS-celler, hvor det endogene TPR-genet (Translocated Promoter Region) er modifisert ved hjelp av CRISPR/Cas9-teknologi for å kode for et in-frame SNAP-merke. TPR er et stort coiled-coil-nukleoporin som lokaliseres til kjernekurven på nukleoplasmatisk side av kjerneporekomplekset (NPC). Ved å merke TPR på dets endogene locus, uttrykkes fusjonsproteinet under naturlig regulatorisk kontroll, noe som bevarer fysiologiske ekspresjonsnivåer og opprettholder riktig inkorporering i kjernekurvstrukturen.
SNAP-taggen muliggjør kovalent merking av TPR med benzylguanin-konjugerte fluorescerende substrater i levende eller fiksert celler, noe som gir svært spesifikk og stabil visualisering. I U2OS-CRISPR-TPR-SNAP-celler viser merket TPR en karakteristisk punktformet ringlignende fordeling ved kjernemembranen, som tilsvarer NPC-assosierte nukleære kurvstrukturer. Dette systemet er godt egnet for kvantitativ fluorescensmikroskopi, superoppløsningsavbildning, puls-jakt-merking og dynamiske studier av nukleær kurvmontering og omsetning. Den flate morfologien og de store kjernene i U2OS-celler muliggjør høyoppløsningsavbildning av strukturer assosiert med kjernemembranen.
TPR spiller en avgjørende rolle i mRNA-eksport, regulering av kjernetransport, kromatinorganisering ved kjernens periferi og romlig genomorganisering. TPR er også involvert i dannelsen av kjernetransportrelaterte underkompartimenter og i utelukkelsen av heterokromatin fra kjernens pore-assosierte regioner. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP gir en fysiologisk relevant modell for å dissekere arkitekturen og dynamikken i nukleær kurv, undersøke nukleocytoplasmatiske transportmekanismer og studere kromatininteraksjoner assosiert med kjernen under endogene ekspresjonsforhold.
- Vev
- Bein
- Sykdom
- Osteosarkom
- Metastaseområde
- Primærsvulstens lokalisering (bein)
- Søknader
- Kjerne-kurvbiologi; TPR-mediert mRNA-eksport; regulering av transport mellom kjernen og cytoplasmaet; kromatinorganisering ved kjernens periferi; underkompartimenter for kjernetransport; genomets romlige organisering; superoppløsningsmikroskopi; SNAP-puls-jakt-merking; utelukkelse av heterokromatin fra poreassosierte områder
02Klassifisering
- Organisme
- Menneske
- Sex
- Kvinne
- Vekstegenskaper
- Tilhenger
- GMO-status
- GMO-S1
- Detaljer om GMO-status
- GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-CRISPR-TPR-SNAP) contains a CRISPR-engineered TPR-SNAP fusion enabling fluorescent and chemical labeling of the TPR nuclear basket protein. The construct is stably integrated. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosikkerhetsnivå
- 1
03Egenskaper
- Morfologi
- Epitel-lignende
- Celletype
- Epitelceller (osteosarkom)
- Fordoblingstid
- ca. 24 til 36 timer
04Identifikatorer
- Kildehenvisning
- U2OS-CRISPR-TPR-SNAP (Cytion-katalognummer 300667)
- NCBI-skattenummer
- 9606
- Innskjærer
- Ellenberg-laboratoriet (EMBL)
05Uttrykk og mottakelighet
- Proteinekspresjon
- TPR, SNAP-tag
06Håndtering og kultur
- Næringsmedium
- McCoys 5a, m: 3,0 g/L glukose, m: stabil glutamin, m: 2,0 mM natriumpyruvat, m: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion artikkelnummer 820200a)
- Inkubasjonsatmosfære
37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.
- Kosttilskudd
- Suppler med 10 % FBS, 3,0 g/L glukose, stabil glutamin, 2,0 mM natriumpyruvat, 2,2 g/L NaHCO3, 1 % NEAA
- Dissosiasjonsmiddel
- Accutase
- Subkultivering
- Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
- Oppdelingsforhold
- 1 til 3
- Såtetthet
- 1 til 3 × 10⁴ celler/cm²
- Væskefornyelse
- 2 til 3 ganger per uke
- Tining og dyrking
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Kvalitetskontroll og kryokonservering
- Sterilitet
Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.
For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.
- Frysemedium
- Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
- Oppbevaringsbetingelser
For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.
- Fraktvilkår
Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.
08Donor
- Donorens alder
- 15 år
- Etnisitet
- Kaukasisk
09Juridisk og sikkerhet
- Sikkerhetsregler
- Når du planlegger å oppbevare et kryovial i flytende nitrogen for senere tining, er det obligatorisk å følge strenge sikkerhetstiltak. Det er viktig å bruke egnede vernehansker og -klær, og det er påbudt å bruke ansiktsmaske eller vernebriller under overføring av frosne prøver til eller fra tanken med flytende nitrogen. Dette er for å redusere risikoen for skader som følge av potensielle kryovæskeeksplosjoner ved fjerning, noe som kan føre til at skarpe fragmenter slynges ut.
- Garanti
Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket
For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring
- Avtaler med tredjeparter gjelder
- Ja
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)
