U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP ist eine genomeditierte humane Osteosarkom-Zelllinie, die aus U2OS-Zellen gewonnen wurde, in denen das endogene TPR-Gen (Translocated Promoter Region) mithilfe der CRISPR/Cas9-Technologie modifiziert wurde, um ein In-Frame-SNAP-Tag zu kodieren. TPR ist ein großes Coiled-Coil-Nukleoporin, das sich im Kernkorb auf der nukleoplasmatischen Seite des Kernporenkomplexes (NPC) befindet. Durch die Markierung von TPR an seinem endogenen Locus wird das Fusionsprotein unter nativer regulatorischer Kontrolle exprimiert, wodurch die physiologischen Expressionsniveaus erhalten bleiben und die ordnungsgemäße Einbindung in die Kernkorbstruktur aufrechterhalten wird.

Das SNAP-Tag ermöglicht die kovalente Markierung von TPR mit Benzylguanin-konjugierten fluoreszierenden Substraten in lebenden oder fixierten Zellen, was eine hochspezifische und stabile Visualisierung ermöglicht. In U2OS-CRISPR-TPR-SNAP-Zellen zeigt markiertes TPR eine charakteristische punktförmige ringartige Verteilung an der Kernhülle, die den NPC-assoziierten Kernkorbstrukturen entspricht. Dieses System eignet sich gut für quantitative Fluoreszenzmikroskopie, Superauflösungsbildgebung, Pulse-Chase-Markierung und dynamische Untersuchungen der Kernkorb-Assemblierung und des Kernkorb-Umsatzes. Die flache Morphologie und die großen Kerne der U2OS-Zellen erleichtern die hochauflösende Bildgebung von Strukturen, die mit der Kernhülle assoziiert sind.

TPR spielt eine entscheidende Rolle beim mRNA-Export, der Regulation des Kerntransports, der Chromatinorganisation an der Kernperipherie und der räumlichen Genomorganisation. TPR ist auch an der Bildung von kernbezogenen Subkompartimenten und am Ausschluss von Heterochromatin aus den mit den Kernporen assoziierten Regionen beteiligt. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP bietet ein physiologisch relevantes Modell für die Analyse der Architektur und Dynamik des Kernkorbs, die Untersuchung von Mechanismen des nukleozytoplasmatischen Transports und die Untersuchung von Chromatin-Wechselwirkungen im Zusammenhang mit der Kernhülle unter endogenen Expressionsbedingungen.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung