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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107
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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107

Cell line · Artikelnummer 300294

Die Zelllinie U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 stellt eine spezialisierte Variante der weit verbreiteten menschlichen Osteosarkom-Zelllinie U-2 OS dar. Dieses spezielle Modell wurde...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die Zelllinie U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 ist eine spezielle Variante der weit verbreiteten menschlichen Osteosarkom-Zelllinie U-2 OS. Dieses besondere Modell wurde so entwickelt, dass es die SNAP-markierte Version des Nukleoporins Nup107 exprimiert, einer zentralen Komponente des Kernporenkomplexes, der für den Transport von Molekülen zwischen dem Zellkern und dem Zytoplasma unerlässlich ist. Die Integration der SNAP-Tag-Technologie ermöglicht die biorthogonale Markierung und Visualisierung von Nup107 in lebenden oder fixierten Zellen und bietet damit ein leistungsfähiges Instrument zur Untersuchung des nukleozytoplasmatischen Transports und der Architektur des Kernporenkomplexes unter physiologischen Bedingungen.

Der U-2 OS-Hintergrund bietet mehrere Vorteile, darunter robuste Wachstumsraten und einen gut charakterisierten Karyotyp, die Screening-Anwendungen mit hohem Durchsatz und genomische Studien unterstützen. Die ZFN-Technologie (Zinkfingernuklease), die in dieser Zelllinie verwendet wird, erleichtert die gezielte Genom-Editierung und erhöht die Präzision, mit der Forscher die genetischen Beiträge zum Kerntransport und anderen zellulären Prozessen untersuchen können. Diese Zelllinie ist besonders nützlich für Studien, die darauf abzielen, die Dynamik und Regulierung von Kernporenkomplexen in der Krebsbiologie und Zellphysiologie aufzuklären.

Aufgrund ihrer speziellen Beschaffenheit eignet sich die U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 no.294 Zelllinie hervorragend für fortschrittliche bildgebende Verfahren, einschließlich der Super-Resolution-Mikroskopie, um die Nukleoporin-Funktionen in noch nie dagewesenem Detail zu untersuchen. Sie ist auch eine wertvolle Ressource für die Entwicklung therapeutischer Strategien, die auf Kerntransportwege abzielen, die bei verschiedenen Krankheiten, einschließlich Krebs, eine Rolle spielen. Die SNAP-Tag-Komponente bietet zusätzliche Möglichkeiten für weitere biochemische und proteomische Analysen und macht es zu einem unverzichtbaren Werkzeug auf dem Gebiet der Zell- und Molekularbiologie.

Gewebe
Knochen
Krankheit
Osteosarkom

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-ZFN-SNAP-Nup107 no.294) contains a ZFN-mediated SNAP-Nup107 gene fusion, supporting selective labeling of the Nup107 nuclear pore subunit. The modification is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Bezeichner

Quellenangabe
U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 (Cytion-Katalognummer 300294)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FM
Einleger
Das Ellenberg-Labor (EMBL)

04Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
SNAP-Nup107 (Kernporenkomplex-Protein 107, SNAP-Tag)

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucose, w: stabiles Glutamin, w: 2,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820200a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS, 3,0 g/L Glucose, stabilem Glutamin, 2,0 mM Natriumpyruvat, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAA
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
15 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch