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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107
Pañuelo de papel
Hueso
Enfermedad
Osteosarcoma

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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107

Cell line · Número de producto 300294

La línea celular U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 es una variante especializada de la línea celular U-2 OS de osteosarcoma humano, ampliamente utilizada. Este modelo concreto ha sido...

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01Información general

Descripción

La línea celular U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 representa una variante especializada de la línea celular de osteosarcoma humano U-2 OS, ampliamente utilizada. Este modelo en particular ha sido diseñado para expresar la versión marcada con SNAP de la nucleoporina Nup107, un componente fundamental del complejo del poro nuclear, que es esencial para el transporte de moléculas entre el núcleo y el citoplasma. La integración de la tecnología SNAP-tag permite el marcaje biortogonal y la visualización de Nup107 en células vivas o fijadas, proporcionando una potente herramienta para estudiar el transporte nucleocitoplasmático y la arquitectura del complejo de poro nuclear en condiciones fisiológicas.

El fondo U-2 OS ofrece varias ventajas, incluyendo tasas de crecimiento robustas y un cariotipo bien caracterizado, que soportan aplicaciones de cribado de alto rendimiento y estudios genómicos. La tecnología ZFN (Zinc Finger Nuclease) utilizada en esta línea celular facilita la edición dirigida del genoma, mejorando la precisión con la que los investigadores pueden investigar las contribuciones genéticas al transporte nuclear y otros procesos celulares. Esta línea celular es especialmente útil para estudios destinados a dilucidar la dinámica y la regulación de los complejos de poros nucleares en la biología del cáncer y la fisiología celular.

Debido a la naturaleza especializada de la línea celular U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 no.294, es muy adecuada para técnicas de imagen avanzadas, incluida la microscopía de superresolución, para explorar las funciones de las nucleoporinas con un detalle sin precedentes. También es un recurso valioso para desarrollar estrategias terapéuticas dirigidas a las vías de transporte nuclear implicadas en diversas enfermedades, incluido el cáncer. El componente SNAP-tag añade versatilidad para ulteriores análisis bioquímicos y proteómicos, convirtiéndolo en una herramienta indispensable en el campo de la biología celular y molecular.

Pañuelo de papel
Hueso
Enfermedad
Osteosarcoma

02Clasificación

Organismo
Humano
Sexo
Mujer
Propiedades de crecimiento
Adherente
Situación respecto a los OMG
GMO-S1
Detalles sobre la presencia de OMG
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-ZFN-SNAP-Nup107 no.294) contains a ZFN-mediated SNAP-Nup107 gene fusion, supporting selective labeling of the Nup107 nuclear pore subunit. The modification is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nivel de bioseguridad
1

03Identificadores

Referencia
U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 (número de catálogo de Cytion 300294)
N.º de identificación fiscal del NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FM
Depositario
Laboratorio Ellenberg (EMBL)

04Expresión y susceptibilidad

Expresión de proteínas
SNAP-Nup107 (proteína 107 del complejo de poros nucleares, etiqueta SNAP)

05Manejo y cultivo

Medio de cultivo
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucosa, w: Glutamina estable, w: 2,0 mM Piruvato sódico, w: 2,2 g/L NaHCO3 (número de artículo de Cytion 820200a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Suplementar el medio con 10% FBS, 3,0 g/L de Glucosa, Glutamina estable, 2,0 mM de Piruvato sódico, 2,2 g/L de NaHCO3, 1% de NEAA
Reactivo de disociación
Accutase
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Descongelación y cultivo
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

07Donante

Edad del donante
15 años
Origen étnico
Caucásico