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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107
Tissue
Os
Disease
Ostéosarcome

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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107

Cell line · Product number 300294

The U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 cell line represents a specialized variant of the widely used human osteosarcoma cell line U-2 OS. This particular model has be...

US$800.00excl. tax and shipping
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1

01General information

Description

La lignée cellulaire U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 est une variante spécialisée de la lignée cellulaire U-2 OS d’ostéosarcome humain, largement utilisée. Ce modèle particulier a été conçu pour exprimer la version marquée par un SNAP-tag de la nucléoporine Nup107, un composant essentiel du complexe des pores nucléaires, qui joue un rôle crucial dans le transport des molécules entre le noyau et le cytoplasme. L’intégration de la technologie SNAP-tag permet le marquage biorthogonal et la visualisation de la Nup107 dans des cellules vivantes ou fixées, offrant ainsi un outil puissant pour l’étude du transport nucléocytoplasmique et de l’architecture du complexe des pores nucléaires dans des conditions physiologiques.

La lignée U-2 OS présente plusieurs avantages, notamment des taux de croissance élevés et un caryotype bien caractérisé, ce qui facilite les applications de criblage à haut débit et les études génomiques. La technologie ZFN (nucléase à doigt de zinc) utilisée dans cette lignée cellulaire facilite l’édition génomique ciblée, améliorant ainsi la précision avec laquelle les chercheurs peuvent étudier les contributions génétiques au transport nucléaire et à d’autres processus cellulaires. Cette lignée cellulaire est particulièrement utile pour les études visant à élucider la dynamique et la régulation des complexes de pores nucléaires en biologie du cancer et en physiologie cellulaire.

En raison de la nature spécialisée de la lignée cellulaire U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 no 294, celle-ci est parfaitement adaptée aux techniques d’imagerie avancées, notamment la microscopie à super-résolution, pour explorer les fonctions des nucléoporines avec un niveau de détail sans précédent. Elle constitue également une ressource précieuse pour l’élaboration de stratégies thérapeutiques ciblant les voies de transport nucléaire impliquées dans diverses maladies, notamment le cancer. Le composant SNAP-tag ajoute une polyvalence permettant des analyses biochimiques et protéomiques plus approfondies, ce qui en fait un outil indispensable dans le domaine de la biologie cellulaire et moléculaire.

Tissue
Os
Disease
Ostéosarcome

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-ZFN-SNAP-Nup107 no.294) contains a ZFN-mediated SNAP-Nup107 gene fusion, supporting selective labeling of the Nup107 nuclear pore subunit. The modification is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Identifiers

Citation
U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 (numéro de catalogue Cytion 300294)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FM
Depositor
Le laboratoire Ellenberg (EMBL)

04Expression and susceptibility

Protein expression
SNAP-Nup107 (protéine 107 du complexe des pores nucléaires, SNAP-tag)

05Handling and culture

Culture medium
McCoys 5a, w : 3,0 g/L de glucose, w : stable; glutamine, w : 2,0 mM de pyruvate de sodium, w : 2,2 g/L de NaHCO₃ (référence Cytion 820200a)
Incubation atmosphere

37 °C, 5 % de CO₂, atmosphère humidifiée.

Supplements
Ajouter au milieu 10 % de FBS, 3,0 g/L de glucose, de la glutamine stable, 2,0 mM de pyruvate de sodium, 2,2 g/L de NaHCO₃ et 1 % de NEAA.
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Retirez l’ancien milieu des cellules adhérentes et lavez-les avec du PBS sans calcium ni magnésium. Pour les flacons T25, utilisez 3 à 5 ml de PBS, et pour les flacons T75, utilisez 5 à 10 ml. Ensuite, recouvrez complètement les cellules d’Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laissez les cellules incuber à température ambiante pendant 8 à 10 minutes afin de les détacher. Après l’incubation, mélangez délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifugez à 300 x g pendant 3 minutes. Éliminez le surnageant, remettez les cellules en suspension dans du milieu frais, puis transférez-les dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
Fluid renewal
2 à 3 fois par semaine
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Quality control and cryopreservation

Sterility

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.

Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.

Freeze medium
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (contenant du sérum fœtal bovin) + 10 % de DMSO pour assurer une viabilité adéquate après décongélation, ou du CM-1 (référence Cytion 800100), qui contient des osmoprotecteurs et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryoconservation.
Storage conditions

Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.

Shipping conditions

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

07Donor

Donor age
15 ans
Ethnicity
caucasien