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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107
Tecido
Osso
Doença
Osteossarcoma

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U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107

Cell line · Número do produto 300294

A linha celular U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 representa uma variante especializada da linha celular U-2 OS de osteossarcoma humano, amplamente utilizada. Este modelo específico tem sido...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 representa uma variante especializada da linha celular de osteossarcoma humano U-2 OS, amplamente utilizada. Este modelo específico foi concebido para exprimir a versão marcada com SNAP da nucleoporina Nup107, um componente fundamental do complexo do poro nuclear, que é essencial para o transporte de moléculas entre o núcleo e o citoplasma. A integração da tecnologia SNAP-tag permite a marcação biortogonal e a visualização da Nup107 em células vivas ou fixas, proporcionando uma ferramenta poderosa para estudar o transporte nucleocitoplasmático e a arquitetura do complexo do poro nuclear em condições fisiológicas.

O fundo U-2 OS oferece várias vantagens, incluindo taxas de crescimento robustas e um cariótipo bem caracterizado, que suportam aplicações de rastreio de elevado rendimento e estudos genómicos. A tecnologia ZFN (Zinc Finger Nuclease) utilizada nesta linha celular facilita a edição orientada do genoma, aumentando a precisão com que os investigadores podem investigar as contribuições genéticas para o transporte nuclear e outros processos celulares. Esta linha celular é particularmente útil para estudos destinados a elucidar a dinâmica e a regulação dos complexos de poros nucleares na biologia do cancro e na fisiologia celular.

Devido à natureza especializada da linha celular U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 no.294, é altamente adequada para técnicas avançadas de imagiologia, incluindo microscopia de super-resolução, para explorar as funções da nucleoporina com um pormenor sem precedentes. É também um recurso valioso para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas que visem as vias de transporte nuclear implicadas em várias doenças, incluindo o cancro. O componente SNAP-tag acrescenta versatilidade para outras análises bioquímicas e proteómicas, tornando-o uma ferramenta indispensável no domínio da biologia celular e molecular.

Tecido
Osso
Doença
Osteossarcoma

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This human osteosarcoma cell line (U2OS-ZFN-SNAP-Nup107 no.294) contains a ZFN-mediated SNAP-Nup107 gene fusion, supporting selective labeling of the Nup107 nuclear pore subunit. The modification is stably present. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Identificadores

Referência
U-2 OS-ZFN-SNAP-Nup107 (número de catálogo Cytion 300294)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_B7FM
Depositante
O Laboratório Ellenberg (EMBL)

04Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
SNAP-Nup107 (proteína 107 do complexo do poro nuclear, SNAP-tag)

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
McCoys 5a, com: 3,0 g/L de glucose, com: glutamina estável, com: 2,0 mM de piruvato de sódio, com: 2,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820200a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Suplementar o meio com 10% de FBS, 3,0 g/L de glucose, glutamina estável, 2,0 mM de piruvato de sódio, 2,2 g/L de NaHCO3, 1% de NEAA
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Idade do dador
15 anos
Etnia
Caucasiano