U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP é uma linha celular de osteossarcoma humano editada geneticamente, derivada de células U2OS, na qual o gene TPR (Translocated Promoter Region) endógeno foi modificado usando a tecnologia CRISPR/Cas9 para codificar uma etiqueta SNAP em quadro. O TPR é uma grande nucleoporina em espiral que se localiza na cesta nuclear no lado nucleoplasmático do complexo de poros nucleares (NPC). Ao marcar o TPR no seu locus endógeno, a proteína de fusão é expressa sob controlo regulatório nativo, preservando os níveis de expressão fisiológica e mantendo a incorporação adequada na estrutura da cesta nuclear.

A etiqueta SNAP permite a marcação covalente do TPR com substratos fluorescentes conjugados com benzilguanina em células vivas ou fixas, permitindo uma visualização altamente específica e estável. Nas células U2OS-CRISPR-TPR-SNAP, o TPR marcado exibe uma distribuição pontilhada característica em forma de anel no envelope nuclear, correspondendo às estruturas da cesta nuclear associadas ao NPC. Este sistema é adequado para microscopia de fluorescência quantitativa, imagem de super-resolução, marcação pulse-chase e estudos dinâmicos da montagem e renovação da cesta nuclear. A morfologia plana e os núcleos grandes das células U2OS facilitam a imagem de alta resolução das estruturas associadas ao envelope nuclear.

O TPR desempenha papéis críticos na exportação de mRNA, regulação do transporte nuclear, organização da cromatina na periferia nuclear e organização espacial do genoma. O TPR também está implicado na formação de subcompartimentos relacionados ao transporte nuclear e na exclusão da heterocromatina das regiões associadas aos poros nucleares. O U2OS-CRISPR-TPR-SNAP fornece um modelo fisiologicamente relevante para dissecar a arquitetura e a dinâmica da cesta nuclear, investigar mecanismos de tráfego nucleocitoplasmático e estudar interações da cromatina associadas ao envelope nuclear em condições de expressão endógena.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia