U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP je genomově editovaná lidská osteosarkomová buněčná linie odvozená z buněk U2OS, ve které byl endogenní gen TPR (Translocated Promoter Region) modifikován pomocí technologie CRISPR/Cas9 tak, aby kódoval in-frame SNAP tag. TPR je velký nukleoporin s vinutou strukturou, který se lokalizuje do jaderného koše na nukleoplazmatické straně jaderného pórového komplexu (NPC). Označením TPR v jeho endogenním lokusu se fúzní protein exprimuje pod nativní regulační kontrolou, čímž se zachovávají fyziologické úrovně exprese a udržuje se správné začlenění do struktury jaderného koše.

SNAP tag umožňuje kovalentní značení TPR fluorescenčními substráty konjugovanými s benzylguaninem v živých nebo fixovaných buňkách, což umožňuje vysoce specifickou a stabilní vizualizaci. V buňkách U2OS-CRISPR-TPR-SNAP vykazuje značený TPR charakteristické tečkovité prstencové rozložení na jaderné obálce, které odpovídá strukturám jaderného koše asociovaných s NPC. Tento systém je vhodný pro kvantitativní fluorescenční mikroskopii, superrozlišovací zobrazování, značení pulzním sledováním a dynamické studie sestavování a obměny jaderného koše. Plochá morfologie a velká jádra buněk U2OS usnadňují vysokorozlišovací zobrazování struktur asociovaných s jadernou obálkou.

TPR hraje klíčovou roli v exportu mRNA, regulaci jaderného transportu, organizaci chromatinu na jaderném obvodu a prostorové organizaci genomu. TPR se také podílí na tvorbě subkompartmentů souvisejících s jaderným transportem a na vyloučení heterochromatinu z oblastí spojených s jadernými póry. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP poskytuje fyziologicky relevantní model pro rozbor architektury a dynamiky jaderného koše, zkoumání mechanismů nukleocytoplazmatického transportu a studium interakcí chromatinu spojených s jadernou membránou za endogenních expresních podmínek.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení