U2OS-CRISPR-TPR-SNAP

U2OS-CRISPR-TPR-SNAP е геномно редактирана човешка остеосаркомна клетъчна линия, получена от U2OS клетки, в които ендогенният TPR (Translocated Promoter Region) ген е модифициран с помощта на CRISPR/Cas9 технология, за да кодира SNAP таг в рамката. TPR е голям спираловиден нуклеопорин, който се локализира в ядрената кошница от нуклеоплазмената страна на ядрения порен комплекс (NPC). Чрез маркиране на TPR в ендогенния му локус, фузионният протеин се експресира под естествен регулаторен контрол, запазвайки физиологичните нива на експресия и поддържайки правилното вграждане в структурата на ядрената кошница.

SNAP тагът позволява ковалентно маркиране на TPR с бензилгуанин-конюгирани флуоресцентни субстрати в живи или фиксирани клетки, което позволява високоспецифична и стабилна визуализация. В U2OS-CRISPR-TPR-SNAP клетки маркираният TPR показва характерно точково разпределение, подобно на пръстен, в ядрената мембрана, съответстващо на NPC-асоциираните структури на ядрената кошница. Тази система е подходяща за количествена флуоресцентна микроскопия, изображения със суперразделителна способност, маркиране с импулсно преследване и динамични изследвания на сглобяването и обновяването на ядрената кошница. Плоската морфология и големите ядра на U2OS клетките улесняват изображенията с висока разделителна способност на структурите, свързани с ядрената мембрана.

TPR играе критична роля в износа на мРНК, регулирането на ядрения транспорт, организацията на хроматина в периферията на ядрото и пространствената организация на генома. TPR също така участва в образуването на подкомпартаменти, свързани с ядрения транспорт, и в изключването на хетерохроматина от областите, свързани с ядрените пори. U2OS-CRISPR-TPR-SNAP предоставя физиологично релевантен модел за разлагане на архитектурата и динамиката на ядрената кошница, изследване на механизмите на ядрено-цитоплазмен транспорт и изучаване на взаимодействията на хроматина, свързани с ядрената мембрана, при ендогенни условия на експресия.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация